巖黃連注射液聯(lián)合TACE對(duì)中晚期肝癌患者炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激的影響

張芝華 李淑榮 馬桂勇 孫曉東 陳文龍 劉艷 賈玲玲

原發(fā)性肝癌是臨床常見的消化道惡性腫瘤，我國是肝癌高發(fā)地區(qū)，每年新發(fā)病例在100萬以上，死亡率高居所有惡性腫瘤第二位[1,2]。其中約90%的肝癌患者存在乙型肝炎病毒(HBV)感染史，被認(rèn)為是造成肝功能損傷、肝硬化、肝癌甚至死亡的始動(dòng)因素[3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Toll樣受體4(TLR4)介導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng)在肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等炎性癌癥發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[4-6]。本研究采用巖黃連注射液聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(TACE)治療中晚期肝癌，觀察中西醫(yī)聯(lián)合治療對(duì)患者炎性應(yīng)激反應(yīng)及相關(guān)因子水平的影響，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2019年1月我院收治的中晚期肝癌患者110例，隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組，每組55例。對(duì)照組男41例，女14例；年齡35～62歲，平均(53.16±6.42)歲；TNM分期：Ⅱ期17例，Ⅲ期32例，Ⅳ期6例；分化程度：低分化19例，中分化29例，高分化7例。治療組男44例，女11例；年齡37～66歲，平均(54.22±6.52)歲；TNM分期：Ⅱ期15例，Ⅲ期31例，Ⅳ期9例；分化程度：低分化21例，中分化30例，高分化4例。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)癥狀體征、CT或MRI檢查確診[7]；(2)TNM分期為Ⅱ～Ⅳ期；(3)符合TACE手術(shù)指征；(4)未發(fā)生肝外轉(zhuǎn)移者；(5)所有患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他部位腫瘤者；(2)血液系統(tǒng)疾病、凝血功能障礙者；(3)心﹑肝﹑肺﹑腎等重要臟器功能不全者；(4)妊娠期、哺乳期女性患者。

1.3 治療方法 2組均給予TACE治療，具體方案如下：經(jīng)皮股動(dòng)脈穿刺插入導(dǎo)管，行肝動(dòng)脈造影術(shù)，明確病灶大小、數(shù)量及供血情況，通過肝動(dòng)脈注射化療藥物(5-氟尿嘧啶1 g+奧沙利鉑100 mg)，灌注結(jié)束后注入40%碘化油栓塞劑。術(shù)后常規(guī)進(jìn)行抗感染、營養(yǎng)支持治療。治療組在TACE基礎(chǔ)上加用巖黃連注射液治療。巖黃連注射液12 ml溶于250 ml 10%葡萄糖，靜脈滴注，1次/d，持續(xù)14 d。

1.4 觀察指標(biāo)及方法

1.4.1 標(biāo)本采集：采集2組患者治療前后空腹靜脈血采集8 ml，分兩管，一管加入肝素抗凝，F(xiàn)icoll密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞，另一管3 500 r/min離心10 min，分離血清，-80℃冰箱待測。

1.4.2 PBMCs TLR4表達(dá)：采用流式細(xì)胞儀檢測PBMCs TLR4 陽性細(xì)胞表達(dá)百分率。

1.4.3 血清炎性因子：采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測定血清C-反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、降鈣素原(PCT)。

1.4.4 血清氧化應(yīng)激指標(biāo)：采用放射免疫法測定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。

1.4.5 血清腫瘤活性相關(guān)指標(biāo)：采用ELISA實(shí)驗(yàn)測定血清血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、高爾基體糖蛋白-73(GP-73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)。

1.4.6 血清腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)指標(biāo)：采用ELISA實(shí)驗(yàn)測定血清甲胎蛋白L3(AFP-L3)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)。

2 結(jié)果

2.1 2組PBMCs TLR4表達(dá)比較 2組治療前PBMCs TLR4陽性細(xì)胞表達(dá)百分率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組治療后PBMCs TLR4陽性細(xì)胞表達(dá)百分率均明顯低于治療前(P<0.05)，且治療組TLR4 陽性細(xì)胞表達(dá)百分率低于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

組別TLR4對(duì)照組 治療前73.86±8.42 治療后50.33±6.21?治療組 治療前75.23±9.68 治療后32.67±4.32?#

注：與治療前比較,*P<0.05;與對(duì)照組比較,#P<0.05

2.2 2組血清炎性因子比較 2組治療前血清CRP、TNF-α、PCT比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組治療后血清CRP、TNF-α、PCT均明顯低于治療前(P<0.05)，且治療組CRP、TNF-α、PCT低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

組別CRP(mg/L)TNF-α(μg/L)PCT(μg/L)對(duì)照組 治療前65.43±7.2359.38±5.6912.54±1.54 治療后41.89±5.08?33.80±4.32?8.12±1.00?治療組 治療前68.12±8.4260.51±6.6211.88±1.43 治療后20.66±3.27?#16.87±2.09?#3.59±0.47?#

注：與治療前比較,*P<0.05;與對(duì)照組比較,#P<0.05

2.3 2組血清氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 2組治療前血清SOD、MDA比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組治療后血清SOD均明顯高于治療前，MDA均明顯低于治療前(P<0.05)，且治療組SOD高于對(duì)照組，MDA低于對(duì)照組(P<0.05)。見表3。

組別SOD(U/ml)MDA(μg/L)對(duì)照組 治療前30.38±4.2273.78±8.80 治療后47.06±5.57?50.82±6.44?治療組 治療前28.89±3.8775.21±10.54 治療后62.65±7.62?#26.73±3.21?#

注：與治療前比較,*P<0.05;與對(duì)照組比較,#P<0.05

2.4 2組血清腫瘤活性相關(guān)指標(biāo)比較 2組治療前血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組治療后血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3均明顯低于治療前(P<0.05)，且治療組VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3低于對(duì)照組(P<0.05)。見表4。

2.5 2組血清腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)指標(biāo)比較 2組治療前血清AFP-L3、GGT比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組治療后血清AFP-L3、GGT均明顯低于治療前(P<0.05)，且治療組AFP-L3、GGT低于對(duì)照組(P<0.05)。見表5。

組別VEGFMMP-9GP-73GPC-3對(duì)照組 治療前183.24±19.32215.87±23.35125.87±14.6725.16±3.23 治療后128.13±10.35?157.12±13.76?80.23±9.76?17.32±2.68?治療組 治療前179.89±16.38220.02±25.76129.21±15.8727.03±4.11 治療后68.82±7.11?#100.13±7.26?#42.64±5.31?#11.44±1.60?#

注：與治療前比較,*P<0.05;與對(duì)照組比較,#P<0.05

組別AFP-L3(%)GGT(U/L)對(duì)照組 治療前53.45±6.08136.98±10.87 治療后30.98±4.20?89.43±6.76?治療組 治療前54.21±7.33140.11±12.54 治療后16.77±2.03?#42.25±3.65?#

注：與治療前比較,*P<0.05;與對(duì)照組比較,#P<0.05

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查顯示，每年我國肝癌發(fā)病例數(shù)約占全球發(fā)病例數(shù)的一半以上，且病死率和復(fù)發(fā)率高，已經(jīng)成為危害我國人群公共健康的重大問題[8,9]。目前，肝切除術(shù)和肝臟移植是治療早期肝癌的主要手段，但60%～80%的患者確診時(shí)已發(fā)展至中晚期，加之患者耐受性差，不適宜進(jìn)行根治性手術(shù)[9]。近年來，以TACE為代表的姑息性介入療法已經(jīng)成為治療中晚期肝癌的重要方法，可通過阻斷肝動(dòng)脈血供造成腫瘤血管栓塞，同時(shí)可維持肝臟局部高濃度的化療藥物，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞缺血、缺氧和壞死，但術(shù)后復(fù)發(fā)率高，且容易造成肝組織損傷，影響患者遠(yuǎn)期生存率和生活質(zhì)量[10]。研究顯示，中西醫(yī)聯(lián)合治療中晚期肝癌能夠發(fā)揮優(yōu)勢互補(bǔ)、增效減毒的功效[11]。本研究所用巖黃連注射液具有抗炎、抗氧化、抗肝炎病毒、調(diào)節(jié)免疫等藥理作用，其與TACE聯(lián)合治療中晚期肝癌在提高近期療效、改善臨床癥狀及延長患者生存期方面具有顯著療效，但其發(fā)揮治療作用的具體靶點(diǎn)尚未闡明。

研究顯示，惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展與炎性反應(yīng)密切相關(guān)，而絕大部分肝癌患者早期曾感染HBV，導(dǎo)致患者發(fā)展為肝癌的風(fēng)險(xiǎn)較正常人群高達(dá)200倍以上。HBV感染后可與宿主肝細(xì)胞基因組DNA整合，并通過激活多條信號(hào)通路及多種機(jī)制調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡和分化，在肝癌發(fā)生發(fā)展及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[12]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，TLRs是一類模式識(shí)別受體家族，其中TLR4是該家族的重要成員，主要表達(dá)于單核-巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面，在天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。國內(nèi)外多項(xiàng)研究采用Real time-PCR、Western blot、免疫組化等技術(shù)觀察了TLR4在肺癌、乳腺癌、胰腺癌等腫瘤組織的表達(dá)狀況，結(jié)果顯示TLR4在多種腫瘤組織異常高表達(dá)，且其表達(dá)與疾病進(jìn)展與預(yù)后密切相關(guān)[4-6]。基礎(chǔ)研究表明，TLR4識(shí)別LPS或內(nèi)源性配體后主要通過MyD88依賴途徑和非MyD88依賴途徑激活NF-κB、Foxp3、MAPK/JNK、PI3K/Akt/GSK3β等信號(hào)通路，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移等過程，并通過誘導(dǎo)慢性炎性和大量細(xì)胞因子的產(chǎn)生在腫瘤微環(huán)境形成中發(fā)揮重要作用[13-15]。其中CRP、TNF-α、PCT和SOD、MDA分別是反映炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激程度的常用指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，2組治療前PBMCs TLR4 陽性細(xì)胞表達(dá)百分率及血清CRP、TNF-α、PCT比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2組治療后PBMCs TLR4 陽性細(xì)胞表達(dá)百分率及血清CRP、TNF-α、PCT均明顯低于治療前(P<0.05)，且治療組TLR4 陽性細(xì)胞表達(dá)百分率、CRP、TNF-α、PCT低于對(duì)照組(P<0.05)。說明巖黃連注射液聯(lián)合TACE治療中晚期肝癌能夠通過下調(diào)TLR4的表達(dá)減輕炎性應(yīng)激反應(yīng)，這可能與巖黃連注射液抗炎、抗氧化等作用有關(guān)。

VEGF是一種具有多種生理作用的細(xì)胞因子，對(duì)誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成具有較強(qiáng)作用；MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)的重要成員，通過降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原等成分，增強(qiáng)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力；GP-73是主要表達(dá)在膽管上皮細(xì)胞的一類跨膜蛋白，其水平高低能夠反映肝細(xì)胞損傷程度，與肝功能呈負(fù)相關(guān)；GPC-3是原發(fā)性肝癌組織表達(dá)的一類糖蛋白，在正常肝組織和轉(zhuǎn)移性病灶表達(dá)量很低，在腫瘤細(xì)胞增殖、分化、侵襲和血管生成中發(fā)揮重要作用；AFP-L3是腫瘤細(xì)胞特異性產(chǎn)生的一種腫瘤標(biāo)志物，在腫瘤鑒別診斷、療效判斷和預(yù)后評(píng)估方面較AFP具有更高的靈敏性和特異性；肝癌患者由于腫瘤壓迫膽總管，導(dǎo)致膽汁排泄障礙和血清GGT升高，可作為肝癌鑒別診斷的敏感指標(biāo)之一[16-18]。本研究結(jié)果顯示，2組治療前血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3、AFP-L3、GGT比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2組治療后血清VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3、AFP-L3、GGT均明顯低于治療前(P<0.05)，且治療組VEGF、MMP-9、GP-73、GPC-3、AFP-L3、GGT低于對(duì)照組(P<0.05)。說明在TACE治療基礎(chǔ)上加用巖黃連注射液能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲轉(zhuǎn)移過程，從而降低復(fù)發(fā)率。

綜上所述，巖黃連注射液聯(lián)合TACE治療中晚期肝癌療效確切，能夠顯著下調(diào)PBMCs TLR4表達(dá)，抑制炎性應(yīng)激反應(yīng)，并降低血清相關(guān)因子水平，這可能是其發(fā)揮治療作用的機(jī)制之一。以TLR4為靶點(diǎn)探索下調(diào)其表達(dá)或阻斷其信號(hào)通路激活的方法有可能成為延緩肝癌進(jìn)展的潛在治療方法。