胸椎壓縮性骨折伴脊髓損傷患者血清Fbg TNF-α Neuritin水平與神經功能的關系

秦建英 陳清漢

1)河南醫學高等專科學校附屬醫院骨科，河南 新鄭 451191 2)鄭州大學第二附屬醫院骨科一病區，河南 鄭州 450003

胸椎壓縮性骨折占脊柱骨折的46%～70%[1]。患者骨折合并脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)時，多伴有不同程度的神經功能損害[2]。既往研究報道[3-4]，骨折合并SCI的患者往往會發生骨痂過度生長，其骨折愈合時間也要短于無SCI患者，可能與各種細胞因子的作用有關。多項研究表明，纖維蛋白原(fibrinogen，Fbg)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、神經突起因子(Neuritin)在患者SCI組織中的含量明顯高于正常人群，可能與患者SCI的病情進展和病情嚴重程度有一定關聯。故本研究選取我院90例胸椎壓縮性骨折伴SCI患者，分析患者的血清Fbg、TNF-α、Neuritin水平與神經功能的關聯性。

1 對象與方法

1．1研究對象選取2015-01—2019-06河南醫學高等專科學校附屬醫院骨科收治的胸椎壓縮性骨折伴脊髓損傷患者90例。按脊髓損傷程度分為骨折伴脊髓完全性損傷組(完全SCI組)28例和骨折伴脊髓不完全性損傷組(不完全SCI組)62例。完全SCI組男16例，女12例；年齡33～67(51.26±6.84)歲；ASIA分級：所有患者均為A級。不完全SCI組男39例，女23例；年齡27～71(49.68±7.02)歲；ASIA分級：B級33例，C級18例，D級11例。選取同期單純胸椎壓縮性骨折患者30例納入單純骨折組，其中男17例，女13例，年齡35～66(52.14±6.67)歲；ASIA分級：所有患者均為E級。選取同期健康體檢正常人群30例作為正常對照組，其中男15例，女15例，年齡22～70(50.28±8.16)歲。

納入標準：符合胸椎壓縮性骨折、脊髓損傷的診斷標準[5-6]；患者傷后12 h內就診；單個節段椎體受累；病例資料齊全。排除標準：凝血功能障礙；合并感染；合并良惡性腫瘤；合并骨質疏松、腎性骨病等。

1．2方法2組研究對象均于傷后24 h采集靜脈血，離心收集上層血漿于2 h內待檢，并分離出血清置于-80℃待檢。(1)Fbg檢測：使用全自動血凝儀，采用德國DADE BEHRING公司Fbg試劑盒，檢測前混勻凝血酶試劑，并復溶、混勻纖維蛋白原標準血漿。待測樣本稀釋10倍，預熱處理后加入凝血酶試劑。測定Fbg形成纖維蛋白凝塊的凝固時間。正常范圍為200～400 mg/dL。(2)TNF-α檢測：采用雙抗體夾心法。嚴格按照TNF-α試劑盒操作，試劑盒標準品反復稀釋5次。稀釋后在自動洗板機上分別加樣稀釋液和待測樣本4：1，然后混勻，并進行37 ℃溫育。自動洗板機上待測樣本進行洗滌，重復5次。再加入酶標試劑重復進行溫育、5次洗滌。完畢后加入顯色劑進行避光顯色。最后加入終止液終止反應，450 nm波長下測定吸光度。(3)Neuritin檢測：采用酶聯免疫吸附法。在抗原酶標包被板上分別加樣稀釋液和待測樣本4：1然后混勻，并進行37 ℃溫育。自動洗板機上待測樣本進行洗滌，重復5次。加入稀釋的HRP標記抗體0.1 mL/孔，重復進行溫育、5次洗滌。完畢后加入顯色劑進行避光顯色。最后加入終止液終止反應，450 nm波長下測定吸光度。

1．3評定指標進行脊髓損傷神經功能評價(American Spinal Injury Association，ASIA)[7]。感覺評價分為28個部分，運動評價分為10個部分，評分0～2分。按照損害程度分級[8]：A級：無運動、感覺，完全性損害。B級：運動功能完全消失，可有少量感覺功能。C級：部分肌肉運動功能，50%的肌力小于3級。D級：部分肌肉運動功能，50%的肌力大于3級。E級：感覺和運動均正常。

2 結果

2．1各組患者的Fbg、TNF-α、Neuritin水平比較完全SCI組、不完全SCI組、單純骨折組3組患者的Fbg、TNF-α、Neuritin水平均高于正常對照組(P<0.05)。單純骨折組的Fbg水平高于完全SCI組和不完全SCI組(P<0.05)，且完全SCI組和不完全SCI組的Fbg水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。單純骨折組的TNF-α水平低于完全SCI組和不完全SCI組(P<0.05)，且完全SCI組和不完全SCI組的TNF-α水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。單純骨折組的Neuritin水平低于完全SCI組和不完全SCI組(P<0.05)，且不完全SCI組的Neuritin水平低于完全SCI組(P<0.05)。見表1。

表1 各組患者Fbg、TNF-α、Neuritin水平比較

注：與正常對照組比較，aP<0.05；與單純骨折組比較，bP<0.05；與不完全SCI組比較，cP<0.05

2．2不同脊髓損傷神經功能分級的Fbg、TNF-α、Neuritin水平比較不同脊髓損傷神經功能分級的Fbg、TNF-α、Neuritin水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。隨著患者的神經功能損傷嚴重程度逐漸加重，Fbg水平逐漸下降(P<0.05)，TNF-α和Neuritin水平逐漸上升(P<0.05)。見表2。

2．3Fbg、TNF-α、Neuritin水平與脊髓損傷神經功能分級的相關性Spearmen秩相關分析顯示，Fbg水平與脊髓損傷神經功能分級呈負相關(r=-0.420，P<0.001)。神經功能損傷越嚴重，Fbg水平越低。TNF-α、Neuritin水平與脊髓損傷神經功能分級呈正相關(r=0.313，P<0.001；r=0.694，P<0.001)。神經功能損傷越嚴重，TNF-α、Neuritin水平越高。

2．4預后良好組與預后不良組患者的Fbg、TNF-α、Neuritin水平比較預后良好組的Fbg水平高于預后不良組(P<0.05)。預后良好組的TNF-α和Neuritin水平低于預后不良組(P<0.05)。見表3。

表2 不同脊髓損傷神經功能分級的Fbg、TNF-α、Neuritin水平比較

注：與A級比較，aP<0.05；與B級比較，bP<0.05；與C級比較，cP<0.05

表3 預后良好組與預后不良組患者的Fbg、TNF-α、Neuritin水平比較

2．5Fbg、TNF-α、Neuritin水平預測患者神經功能損傷程度和預后的ROC曲線分析ROC曲線分析顯示，Fbg、TNF-α、Neuritin作為患者神經功能損傷程度的預測指標，當患者Fbg水平低于287.83 mg/dL時(AUC=0.780，靈敏度為78.60%，特異度為75.80%)，TNF-α水平高于2.06 ng/mL時(AUC=0.732，靈敏度為85.70%，特異度為56.50%)，Neuritin水平高于56.70 pg/L時(AUC=0.781，靈敏度為64.30%，特異度為87.10%)，患者神經功能嚴重損傷的風險明顯增加。

Fbg、TNF-α、Neuritin作為患者預后的預測指標，當患者Fbg水平低于293.14 mg/dL時(AUC=0.690，靈敏度為59.00%，特異度為78.40%)，TNF-α水平高于1.91 ng/mL時(AUC=0.713，靈敏度為92.30%，特異度為52.90%)，Neuritin水平高于59.37 pg/L時(AUC=0.698，靈敏度為41.00%，特異度為80.00%)，患者預后不良的風險明顯增加。見表4。ROC曲線見圖1。

表4 Fbg、TNF-α、Neuritin水平預測結果

圖1 A：神經功能損傷嚴重程度的ROC曲線；B：不良預后的ROC曲線Figure 1 A：ROC curve of the severity of neurological impairmentFigure；B：ROC curve of poor prognosis

3 討論

Fbg為凝血蛋白質，能促進骨組織血運重建，促進骨痂形成，加速傷口愈合[9]。多項研究表明[10]，在骨折早期，人體Fbg水平會明顯升高，促進骨折損傷區域凝血和愈合，但Fbg沉積于人體脊髓神經系統中，也會阻礙脊髓神經再生。一項動物實驗報道，Fbg是SCI后軸突再生的抑制因素。本研究結果顯示，單純骨折組的Fbg水平高于完全SCI組和不完全SCI組，隨著患者的神經功能損傷嚴重程度逐漸加重，Fbg水平逐漸下降。此外，Fbg水平與脊髓損傷神經功能分級呈負相關，當神經損傷越嚴重Fbg水平越低。這與LIU等[11]研究報道相符。研究表示，人體微環境具有負反饋調節機制，降低Fbg水平有助于促進患者脊髓修復，促進神經軸突生長。

TNF-α反映機體炎癥水平，在機體免疫功能中發揮良好的調節作用。一項動物實驗表示，大鼠TNF-α水平在SCI 損傷后的24 h達到高峰，然后逐漸下降。本研究結果顯示，完全SCI組、不完全SCI組、單純骨折組3組患者的TNF-α水平均高于正常對照組，且SCI組的TNF-α水平高于單純骨折組。LU等[12]研究也證實骨折伴SCI患者的腦脊液TNF-α水平顯著高于無SCI患者。本研究還發現，隨著患者的神經功能損傷嚴重程度逐漸加重，TNF-α水平逐漸上升，且TNF-α水平與脊髓損傷神經功能分級呈正相關，提示TNF-α在SCI后的神經修復密切相關。

Neuritin作為一種神經營養因子，在促進神經軸突生長中發揮重要作用。在SCI損傷患者中Neuritin水平明顯升高，且SCI損傷越嚴重Neuritin水平越高。一項動物實驗發現，Neuriti能促進脊髓損傷處的神經軸突生長[13]，促進成骨細胞內皮細胞增殖，加速骨折愈合。本研究分析Neuritin與SCI神經損傷的關聯性，結果發現，隨著患者的神經功能損傷嚴重程度逐漸加重，Neuritin水平逐漸上升；Neuritin水平與脊髓損傷神經功能分級呈正相關。

Fbg、TNF-α、Neuritin在預測患者神經功能損傷嚴重程度和不良預后情況具有一定價值。本研究結果顯示，當患者Fbg水平低于287.83 mg/dL時，TNF-α水平高于2.06 ng/mL時，Neuritin水平高于56.70 pg/L時，患者神經功能嚴重損傷的風險明顯增加。當患者Fbg水平低于293.14 mg/dL時，TNF-α水平高于1.91 ng/mL時，Neuritin水平高于59.37 pg/L時，患者預后不良的風險明顯增加。說明Fbg、TNF-α、Neuritin可在一定程度上預測患者的神經功能損傷嚴重程度和不良預后。

胸椎壓縮性骨折伴脊髓損傷患者的血清Fbg、TNF-α、Neuritin水平與神經功能具有一定相關性。由于本研究僅從脊髓損傷和神經功能的角度進行探討，對于其病理機制還需進一步深入研究，動態監測Fbg、TNF-α、Neuritin水平變化，為此類研究提供更多的證據支持。