TMEM206促進表皮生長因子誘導的結直腸癌上皮-間質轉化

鄭啟智，趙勁博，盛偉偉，周建平，董明

（中國醫科大學附屬第一醫院胃腸外科/疝外科，沈陽 110001）

結直腸癌是最常見的惡性腫瘤和癌癥相關死亡原因之一，目前在全世界范圍內其發病率和死亡率仍較高［1］。結直腸癌的發生、發展是一個多基因、多階段、長期形成的復雜病變過程，局部侵襲和遠處轉移是導致結直腸癌患者死亡的最重要因素［2］。上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）被認為是影響結直腸癌侵襲、轉移的重要作用機制之一。生長因子如轉化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）、表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）等介導EMT的發生，同時TGF-β、Wnt、Notch等多種信號通路相互交錯調控EMT的過程［3］。跨膜蛋白（transmembrane protein，TMEM）家族成員被證實在腫瘤發生、發展中起重要作用［4-5］。而本課題組前期研究［6］表明，TMEM206過表達可通過與AKT和細胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）信號通路相互作用，促進結直腸癌的惡性進展。本研究的目的是探討TMEM206影響結直腸癌EMT的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

人結直腸癌細胞系HCT116和SW480（中科院上海細胞庫），TMEM206兔抗人多克隆抗體（英國Abcam公司），pCMV6、pCMV6-Myc-DDK-206（RC202838）（美國OriGene公司），Lipofectamine 3000（美國Invitrogen公司），PVDF膜（美國Millipore公司），p-ERK和c-Myc抗體（美國Cell Signaling Technology公司），纖連蛋白（Fibronectin）、Zeb1、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Snail1、Snail2和β-actin抗體（美國Proteintech公司），二抗（中國中杉金橋），IgG抗體（美國Santa Cruz公司），磁珠（美國Bio-Rad公司），EGF（美國Proteintech公司），牛血清白蛋白（美國Sigma公司），24孔板（美國Corning Costar公司），基質膠（美國BD Biosciences公司）。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養：HCT116、SW480細胞均使用RPMI 1640培養基（含10%胎牛血清和100 IU/mL青-鏈霉素），置于37 ℃、5%CO2的孵箱中培養，隔天消化傳代。

1.2.2 細胞轉染：用Lipofectamine 3000等相關轉染試劑作為溶液，分別使用TMEM206質粒和NC-PCMV6空載質粒對HCT116、SW480細胞進行轉染，將細胞分為TMEM206（206組）和對照組（NC組）。……