辛伐他汀通過NFκ-B通路抑制破骨細胞的分化

于冬冬，趙丹陽，楊鶇祥，楊關林

（1.遼寧中醫藥大學附屬醫院骨科，沈陽 110032；2.沈陽市第一人民醫院神經內科，沈陽 110041；3.遼寧中醫藥大學附屬醫院中西醫結合內科，沈陽 110032）

絕經后骨質疏松癥（postmenopasal osteoporosis，PMOP）是最常見的原發性骨質疏松癥。在PMOP的發病過程中，破骨細胞過度活化同時伴隨過度骨吸收［1］。臨床目前應用的防治PMOP藥物都存在一定程度的不良反應，而且沒有一種抗骨質疏松藥物能夠完全恢復丟失的骨量［2］。

他汀類藥物是臨床治療高脂血癥的常用藥物［3］。研究［4］發現，他汀類藥物影響破骨細胞的分化及骨吸收，但具體的作用機制尚不明確。本研究試圖闡明辛伐他汀對破骨細胞分化調節及其潛在機制，為臨床防治PMOP提供新思路及研究依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞：小鼠單核/巨噬細胞RAW264.7（美國ATCC公司）。

1.1.2 試劑：辛伐他汀（Simvastatin，SIM，美國Sigma公司。溶于無水乙醇，儲存濃度10-2mol/L，-20℃保存）；重組人可溶性RNAK配體（recombinant human soluble RANK Ligand，sRANKL，美國Peprotech公司）；重組人巨噬細胞集落刺激因子（recombinant human macrophage colony stimulating factor，M-CSF，美國Peprotech公司）；DMEM（美國Hychone公司）；胎牛血清（美國Hychone公司）；TRAP染色試劑盒（美國Sigma公司）；核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）免疫熒光檢測試劑盒（中國Beyotime公司）；WST-1檢測試劑盒（中國Beyotime公司）；p65、p-p65一抗（美國Cell signaling公司）；鬼筆環肽檢測試劑（美國AAT BiBe Questy公司）。

1.1.3 儀器：細胞孵箱（美國Thermo公司）；倒置相差顯微鏡（日本Olympus公司）；免疫熒光顯微鏡（日本Olympus公司）；流式細胞儀（美國BD公司）；AMR-100酶標儀（中國杭州奧盛儀器有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 小鼠單核/巨噬細胞RAW 264.7培養及誘導分化：RAW 264.7細胞在DMEM未分化培養基中培養（含10%胎牛血清、不含抗生素、37℃、5%CO2孵箱內培養，注意調節培養基的pH值，寧偏酸性勿堿性）。……