沉默熱休克蛋白27基因對頭頸部鱗狀細胞癌細胞生物學行為的影響

朱震坤 王羽裳 徐欣

山東大學口腔醫學院·口腔醫院種植科 山東省口腔組織再生重點實驗室 山東省口腔生物材料與組織再生工程實驗室，濟南 250012

熱休克蛋白（heat shock protein，Hsp）是一種在進化過程中存在著高度保守性的分子伴侶家族，能夠阻止腫瘤細胞凋亡，且與其轉移有密切關系[1]。Hsp27是小熱休克蛋白家族的重要一員，在細胞受到不良刺激時產生，以保護細胞免受環境中自由基、熱、缺血和毒性物質等各種應激因素導致的損傷，已被證實在細胞分子信號通路的調節，細胞生長、分化和惡化等方面起著重要作用[2-4]。近年來，有報道[5-9]顯示Hsp27與多種腫瘤的發生和轉移有關。在課題組前期研究[10]中，成功建立了頭頸部鱗狀細胞癌轉移模型，發現頭頸部鱗狀細胞癌Hsp27隨其轉移潛能的增加，表達豐度升高。為了進一步研究證實Hsp27在頭頸部鱗狀細胞癌轉移中的作用，本研究構建Hsp27短發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）慢病毒載體，轉染高轉移潛能頭頸部鱗狀細胞癌細胞UM-SCC-22B，觀察長效沉默Hsp27后其轉移生物學行為的改變。

1 材料和方法

1.1 材料

Hsp27 shRNA慢病毒載體質粒pLKO.1（Open Biosystem公司，美國）；pLKO.1空白對照質粒為美國密歇根大學載體中心自行構建并鑒定；病毒顆粒pLenti-shRNA-Hsp27/pLenti-shRNA-ctrl由密歇根大學載體中心包裝生產。

細胞系UM-SCC-22B為美國密歇根大學腫瘤中心Thomas.E.Carey實驗室保存頭頸部鱗狀細胞癌高轉移潛能細胞系，是下咽部原位鱗狀細胞癌同期淋巴轉移灶細胞；所有細胞均于37 ℃、5%CO2細胞培養箱內常規孵育。

改良伊格爾培養基（Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM）、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、雙抗（青霉素100 μg·mL-1，鏈霉素100 μg·mL-1）（GIBCO公司，美國）；……