豬軟骨脫細胞基質對人脂肪干細胞增殖及分化的影響

劉茜 李雪健 王忠山

軍事口腔醫學國家重點實驗室，口腔疾病國家臨床醫學研究中心，陜西省口腔醫學重點實驗室，空軍軍醫大學口腔醫院修復科，西安 710032

在口腔頜面部創傷中，常見鼻、耳廓軟骨或軟骨下組織的缺損，其嚴重影響患者的面部健康、美觀以及生活質量。軟骨是一種無血管、淋巴、神經的組織，其中包含的軟骨細胞屬于終末分化細胞，自我修復與再生的能力非常有限[1]。

近年來，運用脫細胞生物支架材料以及人間充質干細胞進行組織再生的研究越來越多。豬軟骨脫細胞基質（porcine acellular cartilaginous matrix，pACM）是一種天然的生物支架材料，其消除了細胞和抗原成分，同時含有大量膠原及軟骨細胞分泌的多種細胞因子，可以提供類似于天然軟骨的微環境，從而有利于誘導干細胞向軟骨分化[1-2]。人間充質干細胞具有較強的自我更新能力以及多向分化潛能，其中，人脂肪干細胞（human adipose-derived stromal cells，hADSCs）來源豐富，較易獲取，且造成損傷較小[3]。本實驗將pACM與hADSCs進行共培養，研究其對hADSCs增殖及分化的影響，從而在細胞水平探討將pACM與hADSCs聯合應用后進行軟骨再生的可能性。

1 材料和方法

1.1 主要實驗材料及儀器

α-MEM培養基、胎牛血清（Hyclone公司，美國），胰蛋白酶、雙抗（上海碧云天生物技術有限公司），十二烷基硫酸鈉脫細胞液（sodium dodecyl sulfate，SDS）、聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX- 100）、DNA酶、RNA酶（Sigma公司，美國），酶標儀（BioTek弓絲，美國），蛋白定量試劑盒、蛋白質印跡（Western blot）發光液、細胞培養箱（Thermo Scientific公司，美國），熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）儀（Bio-Rad公司，美國），抗SOX-9、抗Ⅱ型膠原纖維α1（collagen type Ⅱ alpha 1 chain，COL2A1）、抗蛋白聚糖（aggrecan，ACAN）（Santa Cruz公司，美國）。……