分子生物學技術在諾如病毒檢測中的應用*

徐澤炎，吳鶯,2

(1.江蘇大學醫學院，江蘇鎮江212000;2. 江蘇大學附屬醫院消化科，江蘇鎮江 212001)

諾如病毒(norovirus, NOV)是引起人類非細菌性胃腸炎的主要病原, 全球約有50%以上的病毒性胃腸炎是由NOV引起[1]。該病毒引起的急性腸胃炎的發病率在我國呈上升趨勢。該病毒感染劑量可低至10～100個病毒粒子，具有很強的外界抵抗力，傳播速度快，極易造成大規模群體感染事件，尤其易在學校、幼兒園、養老院等的抵抗力弱的人群聚集地引起暴發[2]。根據NOV的傳播途徑，糞便、食品和水可作為檢測該病毒的主要樣本。為了適應NOV疫情暴發的處置，檢測技術必須快速和靈敏。傳統檢測NOV的方法有電鏡法[3]和免疫學方法[4]，前者設備昂貴，操作要求高，敏感性低；后者缺乏可用于捕獲高變異NOV保守性片斷的特異性抗體。近年來，隨著分子生物學檢測技術的快速發展，測定與分析NOV全基因組及部分序列已被廣泛應用于臨床快速診斷和流行病學研究[5-6]。

1 基于核酸擴增法的NOV檢測技術

核酸擴增法是目前檢測該病毒的主要手段，主要包括實時熒光定量RT-PCR (real-time quantitative RT-PCR,qRT-PCR)、逆轉錄PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)和逆轉錄-環介導等溫擴增法(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)。由于NOV為單股正鏈RNA病毒[7]，須提取NOV的RNA，逆轉錄成cDNA, 再進行PCR。

1.1RT-PCR RT-PCR先將RNA逆轉錄成cDNA，再用PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳進行判別。Jiang等[8]采用RT-PCR首次在糞便中發現NOV。Kojima等[9]針對NOV衣殼蛋白保守區的基因序列設計的引物GI-SKF/GI-SKR和GⅡ-SKF/GⅡ-SKR是檢測NOV的理想引物，其引物具有良好的穩定性與保守度。該方法比較靈敏，但由于模板和試劑等影響，對樣品中的模板只能定性，而且因置于開放體系中操作，污染風險高?！?br>