PCR-RFLP在VVC相關念珠菌菌種鑒定中的應用

丁文靜，渠巍，文田甜

(貴陽市婦幼保健院檢驗科，貴陽 550003)

外陰陰道念珠菌病(vulvovaginal candidosis, VVC)是婦科常見的感染性疾病，反復感染極易發展成為復發性外陰陰道念珠菌病(recurrent vulvovaginal candidiasis, RVVC)，是臨床研究和治療的重點和難點[1]。VVC及RVVC的主要致病菌為白念珠菌，但是隨著免疫缺陷人群的增多，免疫抑制劑在臨床上的使用頻率增加，常規抗真菌藥物的廣泛使用等因素使非白念珠菌引起的念珠菌病越來越多，白念珠菌分離率呈明顯下降趨勢。然而，不同念珠菌對抗真菌藥物的敏感性存在差異，研究發現，非白念珠菌對同種藥物的敏感性明顯低于白念珠菌，光滑念珠菌對兩性霉素B和三唑類抗真菌藥物的耐藥性較高，克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥[2-3]。所以，早期、準確鑒定念珠菌菌種(特別是非白念珠菌)將有利于指導臨床治療。

近年來，分子生物學的飛速發展為微生物的鑒定工作提供了新的途徑，其中，限制性內切酶片斷長度多態性PCR(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)因其操作簡便，靈敏度和特異性較高等特點，廣泛應用于多種微生物的鑒定。本研究期望應用PCR-RFLP分析法對多個念珠菌菌種進行鑒定，并且以念珠菌ITS區段測序結果為“金標準”，對科瑪嘉顯色培養法、Vitek 2 YST鑒定卡、PCR-RFLP 3種方法對念珠菌菌種的鑒定效果進行比較分析，進而選擇一種簡單、快速、準確的鑒定方法。

1 材料與方法

1.1菌株來源 收集貴陽市婦幼保健院2015年6月—2016年5月VVC相關念珠菌培養陽性菌株100株。白念珠菌ATCC 90028、近平滑念珠菌ATCC 22019、克柔念珠菌ATCC 6258由貴州醫科大學南校區臨床醫學研究中心饋贈，熱帶念珠菌ATCC 13803、光滑念珠菌ATCC 15126購于北京中科質檢有限公司。……