肝癌組織中glypican-3、MMP-9 蛋白的表達情況及臨床意義

彭旭 楊靜

（河南省駐馬店市中心醫院病理科 駐馬店 463000）

肝細胞癌的發病具有起病隱匿、病情進展快速、易轉移、預后差等特點，因此對患者進行早期診斷和治療，是降低肝細胞癌患者病死率的主要方法[1]。惡性腫瘤的典型生物學特征是可發生轉移、侵襲[2]。近些年，研究顯示磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3）可作為原發性肝癌的診斷分子標志物，能和多種生長和轉移因子相結合引起腫瘤細胞發生轉移；基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達與腫瘤細胞的轉移、侵襲密切相關，可促進癌細胞突破組織學屏障[3～4]。本研究探討肝細胞癌患者組織中glypican-3、MMP-9 的表達情況，為肝細胞癌患者的早期診斷、臨床治療提供理論依據。現報道如下：

1 材料與方法

1.1 標本 選取2017 年9 月～2019 年3 月我院收治的63 例原發性肝癌患者為研究對象，均經病理學檢查確診，且行根治術治療。患者術前均未接受過任何抗腫瘤治療，臨床資料完整者。63 例患者中男39 例，女24 例；年齡35～80 歲，平均（59.2±5.3）歲。采集63 例患者的肝癌組織標本及距腫瘤組織至少6 cm 處的正常癌旁肝組織50 例。

1.2 實驗方法 常規制備石蠟組織切片（德國SLEE 公司CUT4062 型石蠟切片機），脫蠟，水化，3%H2O2封閉處理后，滴加鼠抗人glypican-3、MMP-9 抗體（英國Abcam 公司），37℃下孵育30 min，經PBS 洗滌；滴加廣譜通用型非生物素化IgG，滴加DAB 染色液，然后經蘇木精復染，以中性樹膠封片，于光學顯微鏡（日本Olympus 公司CKX41-A32RC 型倒置顯微鏡）下觀察各組織標本中glypican-3、MMP-9 蛋白表達情況。glypican-3、MMP-9 蛋白陽性著色為細胞質或細胞膜中出現棕黃色或棕褐色顆粒，以半定量積分法判定染色結果。染色總評分=陽性細胞數評分×陽性染色強度評分，0～4 分為陰性，＞4 分為陽性[5]。

1.3 統計學方法 采用SPSS23.0 統計學軟件分析數據，計數資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肝癌組織及癌旁正常組織glypican-3、MMP-9蛋白表達情況比較 glypican-3、MMP-9 蛋白陽性表達分布區域主要在細胞質和細胞膜中。見圖1。肝癌組織glypican-3、MMP-9 蛋白陽性表達率均高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見表1。

圖1 肝癌組織及癌旁正常組織glypican-3、MMP-9 蛋白表達(×200)

表1 glypican-3、MMP-9 蛋白表達情況[例（%）]

2.2 肝癌組織中glypican-3、MMP-9 表達與臨床病理特征的關系 glypican-3、MMP-9 在肝癌組織中的陽性表達與患者性別、年齡、血管內有無癌栓、腫瘤直徑均無顯著相關性，（P＞0.05），而與包膜是否完整、淋巴結是否發生轉移、被膜是否發生侵犯具有顯著相關性（P＜0.05）。見表2。

表2 肝癌組織中glypican-3、MMP-9 表達與臨床病理特征的關系[例（%）]

3 討論

目前如何在基因水平上更早期、準確地診斷原發性肝癌是臨床研究的重點。研究顯示，glypican-3可激活經典Wnt 信號途徑，主要通過自分泌和旁分泌的方式來使Wnt 基因高表達，進而刺激體內和體外原發性肝癌細胞生長。另外，glypican-3 還可通過促進Wnts 與其特異的Frizzled 受體結合，進而促進細胞的惡性轉化和腫瘤的持續增殖[6～7]。

在肝癌細胞中，與glypican-3 表達相關的基質金屬蛋白酶和生長信號分子發生了改變；而MMP-9是主要降解Ⅳ型膠原的基質蛋白水解酶，可促使肝癌細胞穿越組織屏障，其在多種惡性腫瘤組織中高表達，并增加了腫瘤細胞的侵襲能力[8～9]。本研究中，肝癌組織glypican-3、MMP-9 蛋白陽性表達率顯著高于癌旁正常組織。在腫瘤組織中，肝癌、絨毛膜癌、甲狀腺癌、卵黃囊瘤、黑色素瘤可見glypican-3 表達，而在乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、卵巢癌中表達下降或不表達，表明glypican-3 具有在癌組織特異表達的特性[10]。肝細胞癌患者的臨床病理參數、預后等與肝癌細胞的惡性生物學行為之間的關系日漸受到人們的關注。本研究進一步分析發現，glypican-3、MMP-9 在肝癌組織中的陽性表達與患者性別、年齡、血管內有無癌栓、腫瘤直徑均無顯著相關性，而均與包膜是否完整、淋巴結是否發生轉移、被膜是否發生侵犯具有顯著相關性。

綜上所述，glypican-3、MMP-9 在原發性肝細胞癌的發生及進展過程中起重要作用，原發性肝癌組織中存在glypican-3、MMP-9 異常高表達現象，可作為肝癌患者早期檢測指標。但有關其對肝癌細胞侵襲及轉移機制仍需進一步深入研究。