建立實時熒光LAMP法檢測肺炎支原體*

吳亮，夏雯，陰晴，戴曉玥，鄒治情，王海波，陳盛霞，易承學

(1. 江蘇大學醫學院，江蘇鎮江 212013；2. 江蘇大學附屬醫院檢驗科，江蘇鎮江212000；3. 鎮江市第一人民醫院兒科，江蘇鎮江212000；4. 鎮江市高等專科學校醫藥與化材學院，江蘇鎮江 212028)

肺炎支原體(Mycoplosmapneumonia, Mp)是社區獲得性肺炎的重要病原體之一。5～20歲的兒童和青少年是Mp感染的主要人群。雖然Mp感染具有自限性，但早期診斷和早期治療可以有效縮短病程并減少并發癥的發生[1]。支原體肺炎與其他病原體感染的肺炎在臨床癥狀和影像學上并無明顯差異，并且Mp對常規治療肺炎或上呼吸道感染的藥物(如青霉素或頭孢菌素)天然耐藥，因此及時準確的Mp實驗室診斷技術對于支原體肺炎治療具有重要意義[2]。

近年來發展的環介導等溫擴增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技術已經應用于臨床各種病原體檢測[3]。LAMP技術較經典PCR法或實時熒光PCR法具有快速、高效、特異、靈敏和經濟等優點，其檢測的靈敏度和特異性高于PCR法[4]。現有報道的Mp-LAMP檢測技術在反應完畢后需打開PCR管蓋，加入SYBR Green Ⅰ染料或通過瓊脂糖電泳判讀結果，開蓋操作會增加發生氣溶膠污染的概率，造成假陽性[5]。通過在LAMP反應體系中添加特殊熒光染料SYTO-9，可以實現在反應過程中實時監測反應產物生成，免去開蓋操作，有效避免氣溶膠污染[6]。實時熒光LAMP法尚未見應用于Mp檢測。本研究建立實時熒光LAMP法檢測Mp，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1材料和儀器

1.1.1樣本和質粒 收集2018年2—6月江蘇大學附屬醫院兒科收治的呼吸道感染住院患兒102例(男56例，女46例，年齡2～11歲)。……