蘆薈大黃素誘導斑馬魚肝毒性及作用機制研究

劉藝 王瑞昕 游龍泰 董曉旭

斑馬魚與人類基因同源性高達85%，擁有廣泛的細胞色素P450酶參與代謝反應，包括氧化、羥基化、接合、去甲基化和甲基化[1-3]，能體現Ⅰ相、Ⅱ相、腸菌及多途徑代謝的綜合結果。另具有飼養成本低、體外受精、透明易觀察、單次產卵數較高等特點[4-5]。目前斑馬魚已被美國國家衛生研究院列為繼人和鼠之后的第三大模式生物，可以快速篩選藥物和定量評價待測化合物的肝毒性作用。

大黃為蓼科植物掌葉大黃RheumpalmatumL.、唐古特大黃RheumtanguticumMaxim.ex Balf.或藥用大黃RheumoffcihaleBaill.的干燥根和根莖，具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經的功效[6-7]。然而, 近年有報道大黃中成分對機體的肝功能有不良影響，長期應用可能引起肝損傷，推測蘆薈大黃素可能為肝毒性成分之一[8-10]。另有研究表明蘆薈大黃素能明顯誘導動物肝細胞發生DNA損傷[11]，但蘆薈大黃素的體內致肝毒性作用機制尚未明確。因此，本研究中利用斑馬魚獨特的生理結構優勢，通過觀察不同濃度蘆薈大黃素處理后斑馬魚生存率，確定10%致死濃度(10% lethal concentration，LC10)與最大非致死濃度(maximum non-lethal concentration，MNLC)；進而研究斑馬魚肝臟形態、肝臟不透光度平均值，卵黃囊吸收延遲面積的影響。最后，對斑馬魚CYP450酶，凋亡相關蛋白等進行檢測，探討蘆薈大黃素致肝毒性的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

野生型AB品系斑馬魚，以自然成對交配繁殖方式進行。以上斑馬魚均飼養于28 ℃的養魚用水中(水質：每1 L反滲透水中加入200 mg速溶海鹽，電導率為480～510 μS/cm；pH為6.9～7.2；硬度為53.7～71.6 mg/L CaCO3)。飼養管理符合國際實驗室動物護理評估和認證協會(AAALAC)認證的要求。……