老年大鼠膀胱排尿功能及平滑肌細胞表型變化

周海永 顏俊鋒 趙凡 郁建迪 胡海平 張春和

膀胱功能障礙是常見的泌尿外科疾病，主要臨床表現有尿頻、尿急、夜尿增多等儲尿期癥狀和尿液排空障礙等排尿期癥狀[1]，且多見于老年人群，嚴重影響其生活質量[2-3]。Rohrmann等[4]對 8 627名中老年（48～79歲）男性的臨床調查結果顯示，75.3%、22.0%、2.7%伴有輕、中、重度下尿路癥狀，且輕重程度與年齡呈正相關。以往研究顯示，下尿路結構的改變（梗阻）或神經支配的病變是老年人排尿障礙的主要病因[5-8]。但在后續的研究中發現，膀胱的衰老也是導致老年人下尿路癥狀的主要原因。Kimura等[9]認為衰老會使膀胱與尿道協同性下降，從而導致膀胱排空障礙。Mansfield等[10]發現老年大鼠膀胱組織中M3受體表達下調，進而導致膀胱收縮功能受損。有證據表明，具有正常結構及收縮功能的膀胱平滑肌對于維持膀胱儲尿與排尿功能至關重要[11]。本研究對老年SD大鼠膀胱排尿功能的變化及組織結構改變作一探討，并通過復制性衰老細胞模型從微觀層面探究衰老所致膀胱平滑肌細胞（bladder smooth muscle cell，BSMC）表型轉化。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 雄性SPF級SD大鼠16只，由浙江中醫藥大學動物實驗研究中心提供。其中3月齡8只，24月齡8只。飼養條件：溫度（24±2）℃，濕度50%～70%，晝（燈光照明）、夜各12 h。每天添加飼料1次，換水2次，更換墊料2次。動物自由進食、飲水。

1.2 主要試劑 DMEM/F-12高糖培養基購自美國Gibco公司，FBS購自美國Natocor公司，胰酶蛋白購自美國Sigma公司，小鼠抗α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、肌間線蛋白（Desmin）、Ⅰ型膠原（CollagenⅠ）、Ⅲ型膠原（CollagenⅢ）單克隆抗體、小鼠抗β-actin單克隆抗體、異硫氰酸熒光素標記的羊抗小鼠IgG和辣根過氧化物酶標記的羊抗小鼠IgG均購自武漢博士德生物工程有限公司，RIPA裂解液購自碧云天公司。……