QuEChERS-GC-ECD法檢測柑橘類水果中腐霉利等7種常用農藥殘留

畢思遠 ，李保玲，朱志強*，曹濤，甘慧，金虹*

1. 哈爾濱體育學院滑雪教學訓練基地博士后科研工作站（哈爾濱 150008）；2. 廣東省檢迅檢測科技有限公司（東莞 523843）；3. 深圳市匯知科技有限公司（深圳 518000）；4. 深圳市易瑞生物技術股份有限公司（深圳 518101）

中國是柑橘的重要原產地之一，柑橘資源豐富，優良品種繁多，有4 000多年的栽培歷史。柑橘酸甜可口，營養豐富，是許多人喜愛的水果之一。醫學上，柑橘味甘酸、性涼，入肺、胃經；具有順氣、止咳、健胃、化痰、消腫、止痛、疏肝理氣等多種功效，是很好的中藥材。隨著柑橘經濟效益的提升，柑橘的種植面積不斷擴大，柑橘產業作為果農收入的主要來源，成為當地農作物經濟的支柱產業。由于柑橘病蟲種類多，危害大，許多農戶為防治病蟲害及提高柑橘產量，經常噴灑大量農藥，導致部分柑橘農藥殘留超標[1-6]。菊酯類農藥是柑橘類經常噴灑的農藥種類之一，具有蓄積性，即使低劑量長期接觸也會引起慢性疾病。因此，檢測柑橘中菊酯類農藥的殘留情況具有十分重要的意義。

菊酯類農藥目前應用最多的是農業部NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》的測定方法。該前處理方法用時較長，且用到正己烷、丙酮、乙腈3種溶劑。QuEChERS是近年來國際上發展迅速的用于農產品檢測的前處理技術，于2003年首次被報道使用于水果蔬菜中。該方法與NY/T 761—2008的前處理方法相比，減少了樣品取樣量和溶劑的使用量，解決了分析時間長、溶劑使用量大等問題，被廣泛推廣于很多國家和地區[7-14]。因此，試驗采用QuEChERS前處理方法對柑橘類水果樣品提取、凈化，氣相色譜儀配備ECD檢測器上機檢測，分析柑橘類水果中的7種菊酯類農藥的殘留量，為柑橘類農藥殘留的風險評估提供重要的數據支持。

1 材料與方法

1.1 儀器

7890A型氣相色譜儀配備ECD檢測器（安捷倫科技公司）；DB-17毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，安捷倫科技公司）；ME204電子天平（瑞士梅特勒公司）；DSY-VI型氮吹儀（上海東精華苑科技公司）。

標準物質：質量濃度均為100 μg/mL的百菌清、腐霉利、三唑酮、聯苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯，農業部環境保護科研監測所。

丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正己烷（均為色譜純，TIDEA化學試劑公司）；醋酸鈉（分析純，國藥化學試劑有限公司）。

QuEChERS萃取包（5 g硫酸鎂，1.5 g乙酸鈉）；QuEChERS凈化管（1.2 g硫酸鎂、500 mg PSA和400 mg GCB，上海安譜科技有限公司）。

1.2 色譜條件

進樣口溫度220 ℃；檢測器溫度250 ℃；柱流量1.2 mL/min；尾吹65 mL/min；載氣，氮氣；分流比10︰1。

升溫程序：初始溫度60 ℃，以15 ℃/min升溫速率升至180 ℃，保持3 min，再以20 ℃/min升溫速率升至300 ℃，保持2 min。

1.3 樣品處理

樣品溶液的制備：取新鮮的柑橘樣品，經縮分后將其切碎，充分混勻后放入食品粉碎機粉碎，制成待測樣品。放入包裝容器中備用。

樣品提取：準確稱取10.0 g已制備好的柑橘樣品，放入25 mL離心管中，加入10 mL一酸乙腈溶液，旋渦混合后，加入QuEChERS萃取包（5 g硫酸鎂、1.5 g乙酸鈉），劇烈振蕩3 min，在離心機中以5 000 r/min離心3 min。上清液備用。

樣品凈化：移取5 mL離心后的上清液到QuEC-hERS凈化管（1.2 g硫酸鎂、500 mg PSA和400 mg GCB）中，強力振搖1 min使之得以凈化完全。以5 000 r/min離心3 min。精密移取2 mL離心好的上清液到刻度試管中，在氮吹儀中吹至近干后，加入1 mL正己烷溶解殘渣。經0.22 μm有機濾膜過濾，進樣色譜系統。

1.4 標準溶液制備

標準儲備溶液：精密移取質量濃度均為100 μg/mL的百菌清、腐霉利、三唑酮、聯苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯，標準溶液，各1 mL，置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，即得10 μg/mL的各單標溶液儲備液，備用。

2 結果與討論

2.1 萃取溶劑的確定

乙腈、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷為常見的農藥殘留測定所用的萃取溶劑。相比于其他3種溶劑，乙腈能很好地降低對脂肪、糖類等的溶解性（柑橘中含有大量糖類）。而且用乙腈提取時，提取物中雜質較少，干擾小。為更好地萃取對酸堿度敏感的農藥，降低降解程度，采用1%乙酸乙腈作為提取溶劑，7種農藥的回收率有了很大提高（見表1）。綜合考慮，選擇1%的乙酸乙腈作為提取溶劑。

表1 2種萃取溶劑回收率結果比較

2.2 色譜柱的選擇

色譜柱作為氣相色譜的核心部分，在待測物的分離及靈敏度的高低方面起著至關重要作用。試驗選擇DB-17（30 m×0.25 mm，0.25 μm），HP-5（30 m×0.25 mm，0.25 μm）和DB-1（30 m×0.25 mm，0.25 μm）3種色譜柱，配制0.5 μ g/mL 7種農藥的混標溶液進行色譜分離測試，比較DB-17、HP-5和DB-13種色譜柱上7種農藥的分離度和靈敏度。結果表明，DB-17和DB-1毛細管柱分離效果較HP-5好，但是DB-17較DB-1待7種農藥的靈敏度高。為保證檢測結果能準確定量，選擇測DB-17（30 m×0.25 mm，0.25 μm）作為測定的分離柱。圖1為7種農藥在DB-17上分離的標準圖譜，圖2為陽性樣品的典型譜圖。

圖1 7種農藥在DB-17上分離的標準圖譜

圖2 陽性樣品典型圖譜

2.3 線性方程及檢出限

精密移取一定量1.4的標準儲備溶液，用正己烷依次配制成百菌清、腐霉利、三唑酮、聯苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯和氯菊酯的質量濃度均為0.02，0.10，0.50，1.00，1.50和2.00 μg/mL的混合標準溶液，作為標準曲線溶液，進樣氣相色譜。以各農藥殘留的色譜峰面積為縱坐標，對應的質量濃度為橫坐標，做線性分析。ECD檢測器具有較高的靈敏度，采用以3倍信號與噪聲比（S/N）計算7種農藥的檢出限。結果見表2。

表2 7種菊酯類農藥線性范圍、線性方程、相關系數和檢出限

2.4 加標回收及精密度試驗

稱取3份10.0 g的樣品，分別加入最終理論值為（0.1 mg/kg）、中（0.5 mg/kg）、高（1.0 mg/kg）3個水平濃度的混合標準溶液，按照1.3樣品的提取及凈化過程處理樣品，待儀器穩定后，進樣氣相色譜分析。得到7種農殘的實際含量值，以實際含量值與理論加標濃度的比值計算3個水平的回收率。每個水平濃度點的樣品溶液重復進樣6針，計算儀器的精密度。回收率及精密度測定結果見表3。由表3可以看出，7種農藥在3個水平的加標回收率范圍在85.7%～95.2%之間，精密度測定值在1.65%～3.26%之間，符合分析測定的要求。

表3 回收率試驗結果

2.5 重復性試驗

稱取10.0 g的樣品，加入7種農藥殘留的混標溶液，使最終理論值為0.1 mg/kg，按照1.3樣品的提取及凈化過程處理樣品，同法配制6份待測溶液。計算6份樣品溶液檢測結果，計算精密度測定的相對標準偏差。結果見表4。由檢測數據得出，7種農藥精密度測試的RSD在1.29%～3.90%之間。

表4 重復性結果

3 結論

建立一種改進的QuEChERS前處理柑橘類水果，DB-17色譜柱分離、氣相色譜儀配備ECD檢測器檢測柑橘類水果中百菌清、腐霉利、三唑酮、聯苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯7種常用農藥殘留的方法。方法中確定1%的乙酸乙腈作為提取溶劑。通過比較，選擇DB-17色譜柱對7種農藥進行分離；同時對方法的線性及檢出限、加標回收與精密度、重現性進行考察。結果表明該方法具有前處理操作簡便、成本低、檢出限低、準確度及靈敏度高的優點，適用于柑橘類水果中有機氯及菊酯類農藥的測定。