不同方法測定飼料中木質素(ADL)含量的研究

李澤民 王本琢 王洪敏 王云鵬 張晨 張桂國 張崇玉

不同方法測定飼料中木質素(ADL)含量的研究

李澤民①?王本琢②?王洪敏③王云鵬①張晨①張桂國①張崇玉①*

（①山東農業大學動物科技學院，山東省動物生物工程與疾病防治重點實驗室 山東 泰安 271018 ②山東省無棣縣農業農村經濟發展服務中心 ③山東省沂水縣畜牧局崔家峪獸醫工作站）

本研究旨在探索一種快速測定飼料中木質素(ADL)含量的方法，同時評價聚酯網袋法測定飼料中ADL含量的準確性。本試驗采用聚酯網袋法、國標法(GB/T20805-2006)和ANKOM濾袋法三種方法，分別測定了米糠粕、豆粕、甜高粱、玉米秸、大豆秸、干豆渣、大麥麩、青貯玉米、稻殼粉、麥殼、國槐、苜蓿、玉米芯共16種飼料中ADL含量，比較不同方法的測定結果，對不同方法的準確度進行分析。結果表明：（1）聚酯網袋法與國標法的測定結果一致；兩種方法測定結果呈強正相關，線性回歸方程為：y=1.0029x-0.0779(r=0.9997)。（2）ANKOM濾袋法測定飼料中ADL含量的結果與國標法一致，二者呈強正相關，線性回歸方程為：y=0.9701x+0.2972(r=0.9975)。聚酯網袋法測定飼料中ADL含量的方法具有測定時間短、效率高、成本低、準確度高等特點。

聚酯網袋法 木質素 ANKOM濾袋法

Goering和Van Soest[1]在1970年提出中性洗滌纖維(NDF)、酸性洗滌纖維(ADF)和木質素等指標評價飼料的營養價值，木質素是飼料試樣經過酸性洗滌劑和濃硫酸處理后得到的殘渣，經干燥后的殘渣質量占試樣總質量的百分數。飼料中ADL含量的測定方法有國家標準法(GB/T20805-2006[2])、ANKOM濾袋法等，然而國標法測定方法的缺點是測定時間長、步驟繁瑣、過濾麻煩和效率低下等，ANKOM濾袋法測定設備昂貴，本文旨在研究聚酯網袋法測定飼料中ADL含量，并與國標法和ANKOM濾袋法比較，驗證其準確度，尋求測定飼料中ADL含量的快速檢測方法。

本研究選擇有代表性的飼料樣品，包括米糠粕、豆粕、甜高粱、玉米秸、大豆秸、干豆渣、大麥麩、青貯玉米、稻殼粉、麥殼、國槐、苜蓿、玉米芯，分別用聚酯網袋法、ANKOM 濾袋法、國標法測定這16種飼料中木質素的含量，測定聚酯網袋法的準確度。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗樣品選擇有代表性的飼料樣品，分別是米糠粕、豆粕、甜高粱、玉米秸、大豆秸、干豆渣、大麥麩、青貯玉米、稻殼粉、麥殼、國槐、苜蓿、玉米芯共16種飼料，用粉碎設備將風干樣品粉碎，使其完全通過篩孔直徑1.00mm(18目)篩，制樣后裝入密封袋備用。

1.2 測定方法

1.2.1 飼料中ADL含量的測定方法 （1）傳統法：參照國家標準(GB/T20805-2006)，每個飼料樣品稱1g，做4個平行樣。（2）ANKOM濾袋法：用Ankom 2000纖維測定儀[3]，每個飼料樣品稱1g，做4個平行樣。（3）聚酯網袋法：按照如下方法進行[4, 5]，每個飼料樣品做4個平行樣。①稱樣：選用符合實驗要求的5cm×6cm聚酯網袋，先用耐熔性記號筆編號，稱其質量，記為m1；稱取試樣(1.0±0.05)g左右的樣品，記為m，裝入聚酯網袋內，用封口機封口。②脫脂預處理：如果試樣中脂肪含量高于10%，應預先脫脂。將裝有試樣的聚酯網袋放在燒杯中，加入丙酮或石油醚，用量以浸沒樣品袋為標準。浸泡10min后，取出聚酯網袋放置通風櫥揮發干試劑，待用。③消煮：向配制好的4000ml中性洗滌劑中放入稱好的40個聚酯網袋，再向燒杯內加入8mlα-耐高溫淀粉酶，無水亞硫酸鈉40.0g，同時開啟加熱裝置，煮至微沸并保持1h。煮沸期間應加水保持溶液體積恒定，煮沸完畢取出聚酯網袋，用水沖洗干凈。④酸洗：將消煮后的聚酯網袋放入干凈的燒杯中，加入12.0mol/L的硫酸溶液浸泡3h，每30min輕輕攪拌1次。取出聚酯網袋用熱水洗至中性，再用吸水紙把袋內水分輕輕擠干。⑤烘干：聚酯網袋于干燥箱中(105±2)℃干燥30min，取出聚酯網袋于稱量瓶中冷卻1min，立即稱量，記為m2。⑥灰化：將裝有殘渣的聚酯網袋放入已知質量(m3)的坩堝中，于馬福爐中(500±25)℃灰化30 min，取出后于干燥器內冷卻至室溫，準確稱量坩堝及灰分質量，記為m4。

1.2.2 計算 （1）如殘渣中酸不溶灰分忽略不計，可按下式計算：ADL(%)=(m2-m1)/m*100。式中：m試樣的質量，單位為克(g)；m1聚酯網袋的質量，單位為克(g)；m2聚酯網袋及其袋內殘渣在105℃干燥后的質量，單位為克(g)。（2）如殘渣中酸不溶灰分參與計算，可按下式計算：ADL(%) =(m2-m1-m4+m3)/m*100。式中：m試樣的質量，單位為克(g)；m1聚酯網袋的質量，單位為克(g)；m2聚酯網袋及其袋內殘渣在105℃干燥后的質量，單位為克(g)；m3坩堝的質量，單位為克(g)；m4坩堝及其聚酯網袋殘渣在500℃灰化后的質量，單位為克(g)。

1.3 統計分析方法

試驗數據采用Excel2010進行整理，采用SPSS19.0統計軟件的比較均值過程進行單因素ANOVA分析和配對樣本T檢驗。P=0.05作為差異顯著的判斷標準。試驗結果用平均值和標準誤表示。

2 結果與分析

2.1 聚酯網袋法和國標法測定飼料中ADL含量

用聚酯網袋法和國標法測定的ADL含量見表1。表中數據顯示，用聚酯網袋法和國標法測定結果一致，兩種方法差異不顯著(P>0.05)。聚酯網袋法測定ADL含量(y)和國標法測定ADL含量(x)二者的回歸方程為y=1.0029x-0.0779(r=0.9997)，聚酯網袋法和國標法二者呈強正相關，聚酯網袋法可以替代國標法測定飼料中ADL含量。

2.2 ANKOM纖維濾袋法和國標法測定飼料中ADL含量

（1）ANKOM濾袋法和國標法測定的樣品ADL含量見表2。表中數據顯示，兩種方法測定結果一致，兩種方法結果差異不顯著(P>0.05)。（2）ANKOM濾袋法測定結果(y)和國標法測定結果(x)，二者的回歸方程為y=0.9701x+0.2972(r= 0.9975)，ANKOM濾袋法和國標法二者呈強正相關，ANKOM纖維濾袋法可以替代國標法測定飼料中ADL含量。

表1 聚酯網袋法和國標法測定飼料中ADL含量結果比較(%)

表2 ANKOM濾袋法和國標法測定飼料中ADL含量結果比較(%)

4 討論

國標法是國內測定木質素方法的國家標準，但是該方法步驟繁瑣且難控制[6, 7]，測定過程中，試樣容易粘在燒杯和玻璃坩堝壁上，影響測定的準確度和精密度；一個燒杯測定一個樣品，效率低下[8]。（2）ANKOM濾袋法已經被世界上多個國家采用，我國也對該方法進行了一些研究[9]，但是Ankom纖維分析儀價格昂貴，濾袋價格較高，在飼料廠、養殖場和一些中小企業中不能得到廣泛使用。（3）3種測定方法的比較，聚酯網袋法操作簡單、成本低等優點，可以被廣泛使用。聚酯網袋的標準和參數：大小規格5cm×6cm，三面封口，一面開口；聚酯網，平紋組織，片梭織機，經密為185根/cm，絲徑為30μm，孔徑為24μm；根據聚酯網袋的標準和參數，容易獲得。聚酯網袋符合本試驗的所有條件和要求，主要特點如下：孔徑為24 μm大小均勻一致，完全符合本試驗纖維成分測定對篩孔徑的要求；聚酯纖維強度大，熔點高，耐高溫；不吸潮，105℃烘后前后質量不變；耐各種強酸、強堿、醇、醚、酮、中性和酸性洗滌劑，煮沸或浸泡處理后質量不變且不破袋；在72%濃硫酸中浸泡處理質量不變且不破袋；網袋燃燒后無灰分；網袋在試劑中煮沸既不漂浮，也不沉底，袋子處于直立狀態[10]；確保聚酯網袋法具有較高的精密度和準確度。

3 結論

（1）聚酯網袋法測定飼料中ADL含量結果與國標法一致，二者呈強正相關，線性回歸方程為：y=1.0029x-0.0779，r=0.9997。（2）ANKOM濾袋法測定飼料中ADL含量結果與國標法一致，二者呈強正相關，線性回歸方程為：y=0.9701x + 0.2972(r=0.9975)。（3）聚酯網袋法測定飼料中ADL含量的方法具有測定時間短、效率高、成本低、準確度高等特點。

[1] Van Soest, P.J., J.B. Robertson and B.A. Lewis, Methods for dietary fiber, neutral detergent fiber, and nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition[J]. Journal of Dairy Science, 1991. 74(10): p. 3583-3597.

[2] 中國國家標準化管理委員會. GBT20805-2006飼料中酸性洗滌木質素(ADL)的測定[S]. 北京: 中國標準出版社. 2006.

[3] 張麗英. 飼料分析及飼料質量檢測技術[M]. 北京: 中國農業大學出版社, 2016, 71-86.

[4] 張崇玉, 王保哲等. 飼料中的粗纖維、NDF、ADF和A DL含量的快速測定方法[J]. 山東畜牧獸醫, 2015(9): 20-22.

[5] 山東省質量技術監督局, DB37T3371-2018飼料中酸性洗滌木質素含量的測定聚酯網袋法[S]. 山東. 2018:

[6] 吳紅巖, 謝麗蓉, 蘇玲玲. 用濾袋法測定發酵棉源飼料中木質素含量[J]. 草食家畜, 2018(4): 19-22.

[7] 李朝英, 鄭路等. 用范氏法測定多類植物中酸性洗滌木質素的影響因素研究[J]. 江西農業學報, 2019. 31(3): 61-64.

[8] 李華, 孔新剛，王俊. 秸稈飼料中纖維素、半纖維素和木質素的定量分析研究[J]. 新疆農業大學學報, 2007(3): 65-68.

[9] 劉文靜, 潘葳，任麗花. FIBERTEC2010半自動纖維分析儀測定飼料中纖維素、半纖維素、木質素的方法研究[J]. 福建農業學報. 28(7).

[10] 張崇玉，高志標等. 聚酯纖維篩網袋法測定飼料纖維素與木質素含量的重復性和準確性研究[J]. 山東畜牧獸醫, 2016. 37(7): 1-3.

（2019–10–27）

國家十三五重大研發計劃(子課題)肉羊健康養殖(2018YFD0502104-3)；山東省現代農業產業技術體系產業創新團隊(SDAIT-27-02；SDAIT-23-05)；山東省農業重大應用技術創新項目《糧改飼高產高效生產利用模式與關鍵技術的集成示范》(SDZD-2017)；山東省良種工程(南種北繁，2017LZN036)；山東省“雙一流”獎補資金(SDSYL2016)；山東省農業重大應用技術創新項目(SDZDJS-2017)；

?共同第一作者

S816.5

A

1007-1733(2019)12-0021-02