液相色譜串聯質譜法測定草莓中3種農藥殘留量

呂燕　汪旭波　童越敏

摘 要：

本文建立了同時快速測定草莓中3種農藥的液相色譜-串聯質譜檢測方法。乙腈提取草莓樣品，多壁碳納米管凈化出的凈化液經液質聯用法測定，以多反應監測（MRM）方式采集數據，外標法定量。在5～500μg/L范圍內3種農藥均具有良好的線性關系（線性回歸系數r>0.99）;在3個不同濃度添加水平下，3種農藥的平均回收率為78.9%～103.7%，RSD為1.5%～6.5%，本方法的定量限為0.10～0.50μg/kg。該方法簡便、快捷、準確、重現性好、靈敏度高，適用于草莓中3種殺菌劑的同時檢測。

關鍵詞：

液相色譜-串聯質譜儀;草莓;農藥殘留

中圖分類號：S-3

文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191130007

基金項目：寧波市科學技術局科技惠民項目“動物性食品中頭孢類藥物殘留檢測技術與方法研究”（項目編號：2017C50014）;寧波市科學技術局農業領域重大專項“寧波特色農產品質量安全風險評估及預警技術研究”（項目編號：2015C110004）;寧波市科學技術局社發領域重大科技專項“糧谷中有毒有害物質分析關鍵技術研究與應用”（項目編號：2016C51002）

草莓是我國的一種主要水果品種，大部分農戶采用大棚覆膜的方式種植草莓，大棚環境內溫濕度高，高溫多濕又極易引起病蟲害的發生。草莓果實含糖量高、多汁肉嫩，極易感染灰霉病（Botrytis cinerea），感病率高達60%以上，一旦被感染，果實很快就會腐爛， 連花蕾都不能幸免，嚴重降低草莓的品質和產量。長期以來，我國對灰霉病的防治方法進行了大量的研究，也取得了不小進展，但缺少系統性的綜述報道，尤其缺少相關防治效果及其殘留情況的研究。本文主要研究了氟菌唑、啶酰菌胺、醚菌酯同時作用于草莓中，能夠達到預想的抑菌效果。不過，雖然該類藥物毒性低，但氟菌唑對眼睛黏膜會有輕度刺激，長期接觸可能引起肝腎毒性，而且現在社會對食品安全問題也很重視，為了公民健康，老版的GB2763-2016《食品中農藥最大殘留限量》雖然規定了啶酰菌胺、醚菌酯在草莓中的殘留限量，卻沒有氟菌唑在草莓中的限量，現行的國標方法GB/T 20769也并未涵蓋此藥，剛剛出臺的GB2763-2018《食品中農藥最大殘留限量》報批稿雖然將氟菌唑納入了，但其殘留限量還只是臨時限量，而且目前鮮有同時分析這3種殺菌劑在草莓中殘留分析方法的報道，因此建立方便快捷的草莓中3種殺菌劑殘留量分析方法已是迫在眉睫。

蔬菜水果中多農殘檢測技術目前雖有不少相關報道，使用的儀器方法也都不外乎是氣相色譜法[1-3]、氣質聯用法[4，5]和液相色譜-串聯質譜法[6-8]、液相色譜法[9-12]和氣相色譜-串聯質譜法[13]等;而鮮有報道如本文所研究的同時測定草莓中3種農藥的方法。

本文在已有研究的基礎上建立了同時測定草莓中3種農藥殘留的檢測方法，其靈敏度、精密度和定量限等相關參數均符合殘留分析要求。日后也將對3種農藥在草莓和土壤中的降解和最終殘留量情況進行研究，為我國3種農藥在草莓中的風險評估提供可靠的數據依據和支持。

1 實驗部分

1.1 試劑與標品

甲醇、乙腈均為默克色譜純;甲酸為阿拉丁色譜純;氯化鈉為國藥集團化學試劑有限公司分析純。多壁碳納米管XFM1（南京先豐）、PSA（天津博納科技有限公司）和C18（Agilent）;氟菌唑（Triflumizole）、啶酰菌胺（Boscalid）、醚菌酯（Kresoxim-methyl）標準品：1000mg/L（介質為乙腈），德國Dr;所用草莓來源于本地超市、農貿市場。

1.2 儀器

Waters XEVO TQ液質聯用;IKA T25勻漿機;SIGMA 3K15離心機;N-EVAP氮吹儀。

1.3 標液的配制與貯存

介質為乙腈的氟菌唑、啶酰菌胺、醚菌酯標準儲備液（1000mg/L）避光-18℃儲存，使用前用乙腈將儲備液逐級稀釋至1.0 mg/L，然后用草莓基質稀釋至所需濃度。

1.4 分析方法

1.4.1 提取

稱取5g（精確至0.01g）勻漿后的草莓樣品于50mL聚四氟乙烯帶蓋離心管中，加入20mL乙腈，13000r/min勻漿60s，后蓋蓋震蕩提取1min，再加入3g氯化鈉劇烈震蕩30s后9500r/min離心5min，上層有機相待凈化。

1.4.2 凈化

取1.4.1中有機相5.00mL于裝有20mg多壁碳納米管的10mL具塞離心管中，蓋蓋振蕩凈化2min后，9500r/min離心5min;取4.00mL上清液于40℃水浴中氮吹至近干，用0.5mL0.1%甲酸水溶液和0.5mL乙腈溶解渦旋混勻，過膜，供液質聯用測定分析。

1.5 儀器方法

1.5.1液相部分

液相分離柱：waters UPLC BEH C18MVK（2.1mm×100mm， 1.7μm）;柱溫：40℃;流動相：A相為乙腈+ B相為0.1%甲酸水溶液（具體洗脫程序詳見表1）;進樣量：10μL。

1.5.2 MS部分

電離模式： ESI+（電噴霧離子源）;多級反應監測（MRM） ;離子源溫度150℃;毛細管電壓2.5kV;霧化溫度500℃;脫溶劑氣流速1000L/h;碰撞氣流速50L/h;錐孔電壓30V;RF透鏡電壓0.35V;倍增電壓650V;3種農藥的定性定量離子對等參數詳見表2。

2 結果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

因為草莓含糖量高、水分又多，為能夠更充分地提取待測藥物，實驗中考慮用有機溶劑作提取液，而該有機溶劑選擇了能夠與水互溶的甲醇、乙腈。經過多次嘗試分析發現，雖然甲醇的提取效果不錯，但沒有可行的方法能夠分離出來草莓中大量的水分;而用乙腈不僅具有良好的提取效果，而且能用簡單的鹽析法除去大量的水分，以得到需要的有機相。因此，確定乙腈為最終提取溶劑。