利用人工氣候箱大量飼養煙青蟲研究

余源嬋 于曉飛 張越 商勝華 王小彥 楊茂發

摘要?為能更加有效地提高煙青蟲室內人工飼養效率，滿足試驗用蟲需要，在已報道的煙青蟲飼養方法基礎上，對煙青蟲卵的收集方法及初孵幼蟲轉移方法加以改進。就利用人工氣候箱及自主配制飼料對煙青蟲進行室內人工飼養改進的具體方法細則進行介紹，探究一種適合煙青蟲小空間大量飼養的方法，以期為煙青蟲相關的研究提供足夠供試蟲體。

關鍵詞?人工氣候箱;飼養方法;改進;煙青蟲

中圖分類號?S433.4文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2019）20-0148-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.20.039

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Study on the Large?amount Rearing of Helicoverpa assulta （Guenée）

YU Yuan?chan1，YU Xiao?fei2，ZHANG Yue1 et al?（1.Institute of Entomology of Guizhou University/Provincial Key Laboratory for Agricultural Pest Management of Mountainous Regions，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025;2.College of Tabacco Sciences，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025）

Abstract?To improve the efficiency of tobacco budworm rearing in laboratoty and satisfy the requirement of laboratory，based on the reported method for rearing tobacco budworm，those methods of collecting tobacco eggs and transferring hatching larvae were simplified and improved.This paper described the way of indoor rearing of tobacco budworms by climate chamber and prepared feed，and explored a method suitable for large?amount rearing of tobacco budworms in small space.The study will provide sufficient supply for experimental research related to tobacco budworm.

Key words?Artificial climate chamber;Feeding methods;Improvement;Tobacco budworm

煙青蟲[Helicoverpa assulta （Guenée）]屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae）鈴夜蛾屬（Helicoverpa），在田間主要危害辣椒和煙草，是一種重要的寡食性農業害蟲。研究表明，在長江中下游各煙區每年因該蟲造成的煙草產量損失達5%～10%，大發生年份可超過15%[1]，危害辣椒造成的損失高達20%～30%[2]。早期由于農藥的濫用，導致蟲體產生抗性，近年來隨著人們生活水平的提高，人們開始注重農產品的食用安全，提倡“農藥零增長”，加之全球氣候變暖，使得煙青蟲危害加重[3-4]。為降低煙青蟲的危害，亟需對其生物學特性、生態及生物藥效評估、誘導劑效果評估等方面進行持續深入研究[5-9]。此外，煙青蟲和棉鈴蟲[Helicoverpa armigera （Hübner）]是同屬近緣姐妹種，兩者可進行種間雜交，是用來研究鱗翅目昆蟲遺傳和子一代不育機理的理想試驗材料[10-11]。隨著對煙青蟲和棉鈴蟲兩者生態、毒理和遺傳等研究的深入，隨時需要提供大量生理狀態一致的標準試蟲。目前煙青蟲和棉鈴蟲室內人工繼代飼養技術已經實現，且處于不斷改進之中[12]，其飼養方法漸趨于低成本和高效繁蟲。然而煙青蟲和棉鈴蟲種群擴繁過程中，成蟲散產蟲卵的生物學特性使得卵粒收集困難，卵布上初孵幼蟲轉移困難等問題嚴重影響供試蟲體的擴繁[13]。因此，筆者探究了煙青蟲室內大量飼養的方法，旨在為進一步研究煙青蟲和棉鈴蟲提供參考。

1?人工氣候箱及條件設置

人工氣候箱至少2臺（容積：380L;型號：RXZ-380A（多段）;廠家：寧波江南儀器廠），溫度為（26±1） ℃，光周期為L16∶D8，相對濕度60%～80%。人工氣候箱定期用75%的乙醇擦拭（紫外光照射30 min）消毒熏蒸后使用（每30 d 1次）。

2?飼養設備及用具

①收集卵：醫用脫脂紗布（遵義聯盟醫用器材有限公司）;

②飼養低齡幼蟲：19.2 cm×13.0 cm×7.1 cm容積為1.5 L食品保鮮塑料盒（圖1A、B）、200目尼龍紗網塊、84消毒液;

③飼養3齡幼蟲和高齡幼蟲：環保連體食品原盒（型號P2-50ML）（圖1C）;

④飼養蛹：培養皿、無菌棉花、75%乙醇;

⑤飼養成蟲：羽化展翅籠（圖1D、E）、培養皿、含蜂蜜水的棉花球、交配杯（圖1F）。

3?飼養過程

3.1?飼養器具的清洗和消毒

將培養皿、低齡幼蟲飼養盒等養蟲器具置于盆中，加84消毒液浸泡2 h后戴手套用試管刷刷洗干凈，清水漂洗2次后倒置晾干，噴75%乙醇消毒液進一步消毒，自然風干后隔離放置干凈環境中儲存備用。

3.2?飼料的準備

配制步驟：飼料配方參照董鈞鋒等[12]的方法略作修改，分別稱取麥胚、大豆粉、蔗糖、酵母粉、尼泊金、山梨酸、抗壞血酸、亞油酸（滴）、維生素C、維生素B（片）、氯化鈉、瓊脂、蒸餾水、煙葉等成分，各成分配比：麥胚粉40.0 g，大豆粉20.0 g，蔗糖5.0 g，酵母粉提取物12.0 g，尼泊金1.0 g，山梨酸0.4 g，亞油酸2.0 滴，抗壞血酸1.7 g，維生素C 2.0 g，維生素B 10.0 片，瓊脂粉5.0 g，氯化鈉0.1 g，蒸餾水300.0 mL，煙粉15.0 g。將300 mL 蒸餾水和5 g瓊脂粉倒入電飯煲中加熱至沸騰后加入預先稱量好的麥芽粉、大豆粉、蔗糖，待煮沸10 min后保溫攪拌2 min。之后加入其余組分（酵母粉、尼泊金、山梨酸、抗壞血酸、亞油酸（滴）、維生素C、維生素B（片）、氯化鈉、煙粉）攪拌繼續加熱5 min即可（圖1H）。將高溫煮熟的飼料倒入飼料盒中，待其冷卻后蓋上盒蓋，放入4℃冰箱備用。（部分原材料的加工，煙葉放入60 ℃的烘箱中，待其完全干燥后取出，用小型多功能粉碎機（璐楓LF-600A型）對干燥煙葉進行粉碎，制成煙粉待用;麥胚粉為小麥催芽淘洗干凈后烘干粉碎而成，大豆粉為市售大豆粉。）

3.3?蟲源的引入

于煙青蟲發生期前往貴州省遵義市鳳岡縣進化鎮煙草基地采集煙青蟲幼蟲帶回實驗室投喂人工飼料進行飼養（圖1J）。成蟲飼以25%的蜂蜜水，在人工氣候箱中建立試驗種群。煙青蟲幼蟲鑒定參照文獻[14]的方法。

3.4?幼蟲的飼養

煙青蟲高、低齡幼蟲均用上述飼料進行喂養，3齡以前用19.2 cm×13.0 cm×7.1 cm容積為1.5 L食品保鮮塑料盒進行集體飼養，每天檢查飼料取食情況，并加入新鮮飼料。待蟲體長至3齡大小后進行單頭飼養，飼養容器為事先已進行扎孔處理的環保連體食品圓盒（型號P2-50ML），每盒一頭，根據蟲體生長情況酌情加入飼料，飼料2 d一換。待蟲體進入高齡幼蟲后，加入足量飼料塊，以供其制作土室進行化蛹（圖1K）。操作過程中應注意全程配戴一次性消毒手套，在更換飼料過程中，如發現蟲盒內的蟲感染死亡，直接將該蟲盒移除，幼蟲期13 d左右。高齡幼蟲飼養盒為一次性用品，若以其他飼養器具代替應注重消毒。

3.5?蛹的收集和處理

待蟲體化蛹3 d后，將蟲盒中的蛹收集起來，區分雌雄蛹，隨后分裝入培養皿中進行消毒處理。蟲蛹消毒過程：將蟲蛹放入裝有75%消毒乙醇的培養皿中消毒2 min后用無菌蒸餾水漂洗蟲蛹2次，用棉花吸去蟲蛹表面多余水分后，將蟲蛹轉至提前做好相應標識的干凈大型塑料圓形盒中，盒中放有保濕棉花團（圖1O）;正常管理煙青蟲雌蛹（飼養環境同幼蟲），雄蛹轉至溫度28 ℃、濕度60%～80%、光周期L16：D8的人工氣候室中高溫處理2 d后取出，與雌蛹同放于羽化展翅籠中待其羽化。蛹期約為7 d。

3.6?成蟲的羽化和產卵

觀察羽化籠中蟲蛹體色轉為深褐色后，在籠中提前放置25%蜂蜜水棉花團，以備新羽化的成蟲取食（剛羽化成蟲見圖1L）。將羽化1 d后的成蟲以雌雄比1∶2/2∶1個體比放入交配杯中，杯中同置蜂蜜水棉花球供成蟲取食，杯口用膠圈紗布扎口，注意杯口紗布保濕，倒置交配杯，杯口朝向氣候箱燈管方向（圖1G）。（成蟲成活時間6 d左右）。

3.7?卵的收集、管理及初孵幼蟲收集

自成蟲放入交配杯中第2天后每天更換交配杯紗布收集蟲卵（圖1I），將卵布塊用75%乙醇浸泡1 min消毒后用蒸餾水漂洗干凈放置氣候箱晾干，次日收集放入干凈的蟲盒中，待蟲卵漸變為褐色時，取出1～2塊卵布塊放入初孵幼蟲飼養盒，盒中事先放置適量新鮮飼料塊，將卵布塊有卵一面覆飼料塊上即可（圖1B），以便蟲體孵化后爬行取食（卵期約3 d）。

4?注意事項

（1）因煙青蟲高齡幼蟲具有自相殘殺的習性，待其長至3齡后需分開單頭飼養直至其化蛹，避免其相互撕咬感染致死。

（2）用75%的消毒乙醇噴施后的養蟲器具要自然風干后才可用于養蟲。

（3）利用溫度控制蟲體生長發育，保證試驗蟲齡、蟲質、蟲體近似均勻一致，同時利于飼養管理，減少工作量。

（4）保持飼養環境衛生，防治病原菌侵入或其他捕食性天敵（如蜘蛛）出現影響飼蟲。

（5）一旦發現蟲體感染死亡立刻隔離處理病蟲盒。

（6）替換飼料注意戴好衛生手套，以免手上細菌污染飼料。

（7）冬季應在溫暖的環境內進行蟲管飼料清換，避免蟲體受低溫影響出現滯育或感染病毒死亡。

5?小結與討論

上述煙青蟲人工飼養方法與前人研究相比，存在諸多改進之處。如與李詠軍等[15]飼養方法相比，由分層多格飼養高齡幼蟲改為利用連體環保食品圓盒單盒單頭飼養，貴州大學昆蟲研究所利用前人方法飼養后發現，幼蟲存在串格后相互撕咬感染死亡現象。在成蟲產卵環節中，保持產卵杯口紗布濕潤，將產卵杯倒置，杯口朝向氣候箱燈管方向，這樣可利用成蟲趨光性吸引雌蟲在近光處的濕潤紗布上產卵，便于收集蟲卵。此外，初孵幼蟲的轉移方法也有所改進，由傳統的毛筆挑轉、抖落改為食物誘導轉移，具有簡便易行的特點，同時，大大降低了對蟲體的損傷。然而該飼養方法也存在一些弊端，如幼蟲飼料的清理換新過程較為耗時等。利用該方法飼養棉鈴蟲發現，棉鈴蟲對上述煙青蟲配方飼料有明顯取食趨性，可利用該飼料成功飼養棉鈴蟲直至其羽化產卵（圖1M～P），2～3齡供試幼蟲量可高達2 000頭，空間可供1 000頭高齡幼蟲化蛹，羽化成蟲數完全可以保證蟲體種群繼代飼養。