人IL-12基因載體的構(gòu)建及其在T細(xì)胞中的表達(dá)研究①

鄒云蓮 胡 邊 張李琛 張進(jìn)萍 朱學(xué)鍇 黃行許 嚴(yán)新民

(昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院，昆明650500)

細(xì)胞因子是調(diào)控機(jī)體免疫反應(yīng)的重要因子。以細(xì)胞因子為基礎(chǔ)的腫瘤治療一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。IL-12，由于其在誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫方面發(fā)揮的重要作用，成為科研工作者臨床轉(zhuǎn)化研究的重點(diǎn)研究對象[1,2]。

IL-12是由樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及人類B淋巴母細(xì)胞等細(xì)胞受相應(yīng)抗原刺激后產(chǎn)生，是刺激T細(xì)胞生長，促進(jìn)CD8細(xì)胞記憶性，誘導(dǎo)CD4輔助細(xì)胞向Th1細(xì)胞轉(zhuǎn)化的重要介質(zhì)，這是其發(fā)揮抗腫瘤機(jī)制的重要基礎(chǔ)。此外，IL-12可通過誘導(dǎo)γ干擾素和腫瘤壞死因子-α的產(chǎn)生，降低IL-4對IFN-γ的抑制，負(fù)性調(diào)節(jié)IL-10,轉(zhuǎn)化生長因子β1，從而促進(jìn)免疫細(xì)胞腫瘤浸潤，改善免疫抑制微環(huán)境[3,4]。然而，大量臨床所研究顯示大劑量IL-12蛋白的直接輸注給機(jī)體帶來的毒副作用嚴(yán)重限制其在臨床的應(yīng)用。因此，如何安全有效地向機(jī)體導(dǎo)入IL-12使其揚(yáng)長避短發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)是使IL-12走向臨床所面臨的迫切問題[5,6]。本研究利用基因工程手段體外構(gòu)建人IL-12載體，通過非病毒轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將其導(dǎo)入T細(xì)胞中獲得穩(wěn)定表達(dá)，初步探討該方法的可行性。

1 材料與方法

1.1材料 實(shí)驗(yàn)用的PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)由上海科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院朱學(xué)鍇博士提供；人IL-12 cDNA免費(fèi)索取于廈門大學(xué)韓家淮實(shí)驗(yàn)室；高保真PCR擴(kuò)增酶及T4 DNA連接酶均購自TaKaRa公司；內(nèi)切酶SpeⅠ和SalⅠ購自NBE公司；膠回收試劑盒及無內(nèi)毒素質(zhì)粒大抽試劑盒購自北京天根生物技術(shù)公司；分離PBMC所用的全血來自云南省第一人民醫(yī)院；……