ERK1/2-Runx2信號通路在TNF-α對牙周膜干細胞成骨分化影響中的作用

韓耀倫 王 璐 馬 欣

(河南省人民醫院口腔科，鄭州450000)

牙周病是口腔常見的炎癥性疾病，臨床治療的難點為牙周組織的不可逆性喪失，其治療的核心為牙周缺損骨質的修復，干細胞在骨質缺損修復中具有重要作用，尤其牙周膜干細胞[1]。骨質缺損修復受多種炎性因子影響，也受錯綜復雜的信號通路的調控[2]。研究表明腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)可抑制牙周膜干細胞的成骨分化[3]；研究證實Runt相關轉錄因子2(Runt-related transcription factor 2，Runx2)是重要的成骨細胞特異性轉錄因子，在成骨分化中發揮重要作用[4]；細胞外調節蛋白激酶1/2(Extracellular regulated protein kinase 1/2，ERK1/2)在細胞增殖和分化中具有重要作用，是細胞增殖分化的網絡核心，Runx2為其下游靶基因重要成員，轉錄水平受ERK1/2信號通路調控[5]。 ERK1/2-Runx2通路是否在TNF-α抑制牙周膜干細胞成骨分化中發揮作用尚不清楚。本文將對其進行研究，為臨床提供依據。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1牙周膜標本來源 牙周膜標本來自我院口腔科門診18例正畸治療患者拔出的40顆第一或第二前磨牙，患者近期無急性感染、無牙體及根尖周疾病、無全身系統性疾病、無慢性感染性疾病、無吸煙和特殊藥物服用史，標本取樣前經患者知情同意。

1.1.2主要試劑 胎牛血清、PBS、α-MEM培養基、胰蛋白酶、Ⅰ型膠原酶(美國HyClone公司)，表皮生長因子(Epidermal growth factor，EGF)、茜素紅粉劑、TNF-α等(美國Worthington公司)，鼠抗人APC標記的CD31和CD45單抗、FITC標記的CD90單抗、PE標記的CD105單抗(美國eBioscience公司)，堿性磷酸酶(ALP)試劑盒、逆轉錄-聚合酶鏈免疫反應(Reverse transcription-polymerase chain immuno-reaction，RT-PCR)試劑盒(美國Sigma公司)，鋅指結構轉錄因子(Zinc finger structure transcription factor，Osterix)、骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)、ERK1/2、p-ERK1/2、Runx2、β-actin等抗體(美國Invitrogen公司)。

1.2方法

1.2.1牙周膜干……