內皮抑素30肽對肝癌Bel-7402細胞凋亡作用的影響及機制研究①

李淑艷 吳艷敏 劉 睿 張春晶 姚淑娟 衣同輝 師 巖

(齊齊哈爾醫學院醫學技術學院，齊齊哈爾161006)

內皮抑素(Endostatin,ES)是一種內源性血管生成抑制劑，其在抑制腫瘤形成和轉移，促使腫瘤細胞凋亡等方面具有重要的研究價值。內皮抑素由184個氨基酸殘基組成，通過特異性抑制內皮細胞增殖和血管生成達到抑制腫瘤形成、侵襲和轉移的作用[1,2]。2005年，Robert等[3]證明內皮抑素活性區主要在N端的1～27位氨基酸上[3]。在前期工作中，本課題組截取1～27位氨基酸，并通過RGDRGD靶向連接改造形成人內皮抑素30肽(以下簡稱30肽)，研究表明，30肽可以更有效地殺傷腫瘤細胞，對肝癌細胞的侵襲、遷移和黏附等過程都具有較好的抑制效果[4,5]。但30肽對細胞凋亡相關信號通路的研究至今尚未明確報道，本文擬在前期工作基礎上，研究30肽對肝癌細胞凋亡作用的影響，同時對凋亡相關蛋白和信號通路進行初步研究。

1 材料與方法

1.1材料 肝癌細胞株Bel-7402購自中科院細胞庫，30肽按以往文獻報道方法制備[6]。胎牛血清購自浙江天杭生物科技股份有限公司，DMEM-H培養基購自Gibco公司。CCK-8試劑盒購自南京碧云天生物技術公司，Muse Annexin V Dead Cell Kit購自默克密理博公司，Hoechst33342熒光染料購自北京索萊寶生物科技有限公司。GADPH單抗、FoxM1單抗、MMP-2單抗和MMP-9單抗購自美國Santa Cruz公司，Caspase-3和Caspase-9活性測定試劑盒購自北京索萊寶生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.130肽對肝癌細胞株Bel-7402增殖抑制效果的測定 Bel-7402細胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養基在37℃ 5%CO2培養箱中培養。待細胞長至80%以上時用0.25%胰酶消化，用10%胎牛血清的DMEM-H培養基吹打成單細胞懸液后，按照0.5×104個/孔的密度將細胞接種于96孔板中，置37℃繼續培養?！?br>