Neuropilin-1 對急性淋巴細胞白血病CCRF-CEM細胞生物學特征的影響①

劉宇宏 曹慧琴 劉 卉 李曉勇

(延安大學附屬醫院免疫科，延安716000)

急性淋巴細胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia,ALL)是一種起源于淋巴細胞的B系或T系細胞在骨髓內異常增生的惡性腫瘤性疾病[1]。根據我國白血病發病情況調查，ALL發病率約為0.67/10萬[2]。在油田、污染區發病率明顯高于全國發病率。ALL兒童期(0～9歲)為發病高峰，可占兒童白血病的70%以上[3]。已有研究表明神經菌毛素-1(Neuropilin-1,NRP-1)在白血病細胞中有表達，且ALL中NRP-1的表達較急性髓性白血病(Acute myloid leukemia,AML)中表達更多見[4-6]。

NRP-1最早是作為神經細胞導向調節因子受體被發現，是一類在脊椎動物中高度保守的分子量為130～140 kD的糖蛋白[7,8]。而近年來大量研究結果顯示，人類的許多腫瘤組織上都有NRP-1的表達，包括前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤和胰腺癌，而在相應的正常組織中幾乎不表達[9,10]。NRP-1作為血管生長因子的共受體，在腫瘤血管新生方面發揮著重要的調節作用[11]。目前，NRP-1對急性淋巴系白血病細胞生物學特性影響的相關研究較少。本研究旨在初步探討NRP-1在急性淋巴細胞白血病CCRF-CEM細胞系中的表達及其對CCRF-CEM增殖遷移等生物學特性的影響。

1 材料與方法

1.1材料 RPMI1640培養液、DMEM 培養液、胎牛血清FBS(Gibco)；LB培養基(Solarbio)、Lipofec-tamine 2000(Thermo Fisher Scientific)；全自動細胞計數儀(Countstar-全自動細胞計數儀)；Transwell細胞培養小室(Corning)；高速離心機(Thermo Fisher Scientific)；生物顯微鏡(EVOS)；NRP-1抗體(GeneTex)。CCRF-CEM細胞和293T細胞購買于上海豐暉生物公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養 CCRF-CEM細胞使用含10%FBS和1%雙抗的RPMI1640培養液，293T細胞使用含10%FBS和1%雙抗的高糖DMEM培養液。兩種細胞均置于37℃、5%CO2的培養箱中培養。

1.2.2NRP-1敲低細胞系構建及NRP-1抗體結合能力的鑒定 本研究采用四個質粒系統在293T細胞包裝慢病毒顆粒，其中pLv-NRP-1/shRNA重組質粒由上海吉滿生物公司構建。……