鼠傷寒沙門菌sseK3基因缺失株的構建及其生物學特性研究①

杜付玉 廖成水 郁 川 張春杰 程相朝 楊亞東

(河南科技大學動物科技學院,洛陽市活載體生物材料與動物疫病防控重點實驗室，洛陽 471023)

鼠傷寒沙門菌(Salmonella enterica serovar typhimurium)一直是世界范圍內引起人類食物中毒的主要病原菌[1]。目前主要通過抗生素進行預防和治療，但隨著抗生素的濫用，增強了沙門菌的耐藥性，這不僅降低了治療效果，而且增加了預防和控制的負擔[2]。目前通過基因工程方法構建減毒沙門菌作為口服疫苗是研究的熱點[3]。

不同沙門菌致病島(SPI1和SPI2)編碼的Ⅲ型分泌系統(type Ⅲsecretion system，T3SS)分泌到細胞中的一系列效應物，幫助沙門菌逃避宿主的殺傷作用并在宿主細胞內存活和復制[4]。沙門菌分泌性蛋白K3(Salmonella secreted effector K3，SseK3)是新發現的一種沙門菌T3SS的效應蛋白。研究推測sseK3可能參與了沙門菌的毒力，但具體的作用機制尚不明確[5]。目前對于sseK3的研究相對滯后，且有關于鼠傷寒沙門菌sseK3基因功能等相關研究在國內尚未見報道。因此，本研究運用重組自殺性質粒介導的等位基因交換技術，構建鼠傷寒沙門菌sseK3基因缺失株，并對其生物學特性進行檢測，為更進一步探究sseK3基因的功能及鼠傷寒沙門菌減毒活疫苗的研發提供理論依據。

1 材料與方法

1.1材料 鼠傷寒沙門菌SL1344標準毒株、大腸桿菌χ7213和自殺性質粒pRE112、大腸桿菌DH5α、pBR322質粒均由本室保存；沙門菌屬診斷血清(11種)和各種單因子血清均購自寧波天潤生物藥業有限公司；兔抗鼠IgG-HRP酶標二抗購自北京博奧森生物技術有限公司；二氨基庚二酸(D L-α,ε-Diaminopimelic acid,DAP)購自美國Sigma-Aldrich公司；……