P2X7受體胞外段蛋白的克隆、表達、純化及鑒定①

賈麗娜 彭效祥 李明萱 羅淑萍 張云芳 趙榮蘭

(濰坊醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)系納米醫(yī)學(xué)技術(shù)研究所，濰坊醫(yī)學(xué)院臨床檢驗診斷學(xué)山東省“十二五”高校重點實驗室，濰坊 261053)

近年來嘌呤能離子通道型受體(Purinergic ligand-gcotedion channel 7 receptor，P2X7R)已成為眾多學(xué)者廣泛關(guān)注的熱點，由起初在神經(jīng)系統(tǒng)的初步研究發(fā)展到在多個系統(tǒng)炎癥性疾病的廣泛研究。P2X7R是以ATP為天然配體的非選擇性陽離子通道，在組織損傷、感染、腫瘤微環(huán)境等伴隨炎癥發(fā)生時，受損細胞和死亡細胞釋放ATP使離子通道打開，細胞內(nèi)外的陽離子濃度以及流動方向發(fā)生改變，細胞膜發(fā)生去極化使膜的通透性發(fā)生改變，引起炎癥物質(zhì)如NO、IL-1β、IL-18、TNF-α等釋放進而參與多個系統(tǒng)炎癥反應(yīng)。 P2X7R胞外環(huán)上含有ATP結(jié)合位點，研究顯示抗P2X7R胞外結(jié)構(gòu)域抗體可競爭性結(jié)合ATP結(jié)合位點從而阻斷該受體的激活，如抗P2X7R胞外結(jié)構(gòu)域抗體與P2X7R胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合抑制巨噬細胞的死亡；在破骨細胞向多核巨噬細胞的融合過程中也可被抗P2X7R胞外結(jié)構(gòu)域抗體阻斷[1,2]。除此之外，利用抗P2X7R胞外段結(jié)構(gòu)域抗體，通過流式細胞技術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)及蛋白印跡技術(shù)等可檢測多種免疫細胞及組織中P2X7R表達情況[3]，為研究P2X7R在多種炎癥性及免疫性疾病中的作用及機制提供了重要幫助。鑒于上述抗P2X7R胞外段結(jié)構(gòu)域抗體的廣泛作用，許多研究者嘗試制備抗P2X7R單克隆抗體，但其結(jié)合活性不是很理想[4]，為此本研究嘗試制備高親和性的抗P2X7R胞外段ATP結(jié)合域抗體，為進一步制備抗人P2X7R胞外段單克隆抗體奠定基礎(chǔ)。……