微小RNA-600在卵巢癌組織的表達(dá)及其靶向調(diào)控對氧磷酶3對卵巢癌細(xì)胞株OVCAR-3侵襲和遷移的影響①

李 航 楊 蝶 劉慧芝

(遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)務(wù)處,遵義 563003 )

卵巢癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一[1]。盡管在過去數(shù)十年中卵巢癌的臨床治療策略有了顯著改善，但其5年生存率仍較低，約為35%～38%[2]。至今，關(guān)于卵巢癌的潛在發(fā)展機(jī)制尚不完全清楚。因此，闡明卵巢癌發(fā)生和進(jìn)展的具體機(jī)制對于臨床開展新的診療方案至關(guān)重要。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類進(jìn)化上高度保守的非編碼RNA，通過與靶基因3′非翻譯區(qū)結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)[3]。基于調(diào)控靶蛋白的功能，miRNA在腫瘤的多種生物學(xué)過程中發(fā)揮作用，包括有細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、遷移等，進(jìn)而在腫瘤發(fā)生中扮演致癌或腫瘤抑制功能，并有望成為卵巢癌的潛在治療靶標(biāo)[4,5]。

miRNA-600是一種癌癥相關(guān)miRNA，在胃癌、急性白血病等不同癌癥中發(fā)揮抑癌作用[6，7]。然而，到目前為止，miRNA-600在卵巢癌的作用尚不清楚。因此，在本研究中，我們首先分析miRNA-600在卵巢癌及癌旁的表達(dá)情況，并分析其對卵巢癌侵襲和遷移中的影響及可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑 卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、A2780、OVCAR-3、HO-8910和人卵巢表面上皮細(xì)胞系HOSEpiC均購自中國科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心；RPMI1640培養(yǎng)基購自美國Gibco-BRL公司；10%胎牛血清購自美國HyClone公司；miRNA-600模擬物、miRNA-600抑制劑、模擬物與抑制劑對照物均購自廣州復(fù)能基因有限公司；對氧磷酶3(Paraoxonase 3，PON3)及其對照載體等均購自美國Sigma公司；Lipofectamine 2000購自美國Invitrogen公司；TRIzol、miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、miRNA測定試劑盒均購自武漢生之源生物科技股份有限公司；引物序列購自武漢天一輝遠(yuǎn)生物公司；Western blot所用PON3、E-鈣黏素、N-鈣黏素、基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase，MMP)-2、MMP-9和GAPDH一抗及二抗均購自美國Abcam公司；……