hsa-miR-448過表達下調(diào)HIF-1α對結(jié)腸癌細胞SW480作用及機制研究①

歧紅陽 王云溪 肖占宇 王志民 吳鳳麗 董志超 王 蕾

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，新鄉(xiāng) 453000)

結(jié)腸癌是全球常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率居惡性腫瘤的第3位，并且有逐年升高的趨勢[1,2]。雖然近年來對結(jié)直腸癌的普查力度在不斷加強，手術(shù)方式也在不斷改進，但其 5 年生存率還是不足60%[3,4]。因此，加強結(jié)腸癌預(yù)防和治療有效靶點的研究，是當(dāng)今結(jié)直腸癌研究領(lǐng)域的熱點。最早在牛肺泡巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)了小RNA-448(microRNA-448,miR-448)，并推測其與細胞的免疫應(yīng)答及增殖、凋亡密切相關(guān)[5]。近幾年國內(nèi)外關(guān)于miR-448的報道日益增多，我國最早報道m(xù)iR-448與腫瘤的關(guān)系是在阿奇霉素化療乳腺癌后，發(fā)現(xiàn)阿奇霉素化療乳腺癌使乳腺癌細胞中miR-448的表達顯著下調(diào)，導(dǎo)致miR-448的靶基因SATB1表達上調(diào)，從而引起Twistl表達升高，并激活NF-κB信號通路，最終引起化療誘導(dǎo)腫瘤細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生[6]。現(xiàn)已有研究表明miR-448在乳腺癌、膀胱癌、骨肉瘤和口腔鱗狀細胞癌等疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[7-10]，但miR-448在結(jié)腸癌中的作用尚不清楚。本研究旨在探討miR-448在結(jié)腸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用，及其潛在的分子機制。

1 材料與方法

1.1材料 結(jié)腸癌細胞SW480購自ATCC，胎牛血清購自德國PAN公司，RPMI1640培養(yǎng)基購于美國 Hyclone 公司，Lipofectamine 2000 購于美國 Invitrogen 公司，雙熒光酶報告基因檢測試劑盒購于美國 Promega 公司，Transwell小室購自美國 Corning 公司，SB203580購自北京百奧萊博科技有限公司，miR-448 mimic、miR-448 inhibitor和pcDNA-HIF-1α質(zhì)粒由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2方法

1.2.1靶基因預(yù)測 運用三個在線基因預(yù)測軟件：miRanda(http://www.microna.org/microrna/home.do)、TarBase (http://diana.calab.ece.ntua.gr/tarbase)、TargetScan (http://www.targetscan.org)，預(yù)測miR-448的下游靶基因。

1.2.2實驗分組說明 Ctrl組是正常結(jié)腸癌細胞SW480；……