丹參酮ⅡA逆轉(zhuǎn)TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及其機(jī)制研究①

陳莎莎 李 均

(遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū)中藥應(yīng)用與基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,珠海519000)

慢性腎臟病(Chronic kidney disease,CKD)患病率逐年增高,已成為全球關(guān)注的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(Epithelial mesench-ymal transition，EMT)是CKD的一個(gè)重要特征，導(dǎo)致腎功能受損，并最終發(fā)展為終末期腎病[2]。而目前對(duì)CKD的治療效果仍不滿意。近年來(lái)，中醫(yī)藥對(duì)防治CKD方面具有良好的臨床療效。丹參酮ⅡA(Tanshinone ⅡA)是從丹參根中提取的脂溶性活性成分，具有抗氧化、清除自由基、降低血液黏度、促纖溶、改善血循環(huán)、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞等作用[3,4]。但丹參酮ⅡA抗腎間質(zhì)化方面的作用目前仍不清楚，本實(shí)驗(yàn)研究丹參酮ⅡA對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響并探討其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料 人源性腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)株由中山大學(xué)病理生理系惠贈(zèng)；丹參酮ⅡA購(gòu)自上海愛(ài)立信生物科技有限公司；TGF-β1購(gòu)自美國(guó)Peprotech公司；DMEM低糖培養(yǎng)基、胎牛血清、胰酶均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；CCK-8檢測(cè)試劑盒購(gòu)自日本同仁化學(xué)研究所；RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增試劑盒均購(gòu)自大連TaKaRa公司；兔抗人Fibronectin、Bax、Bcl-2、Caspase-3，抗兔IgG H&L(DyLight?488)均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；兔抗人E-Cadherin、Snail、GAPDH，抗兔IgG HRP二抗、抗兔IgG H&L(Alexa Flour?555)均購(gòu)自美國(guó)CST公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及分組 HK-2細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM低糖培養(yǎng)基在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。鏡下觀察細(xì)胞密度達(dá)80%左右予以傳代。將傳代的HK-2細(xì)胞隨機(jī)分為正常組、模型組及丹參酮 Ⅱ A組；三組細(xì)胞貼壁后用無(wú)血清培養(yǎng)基同步化24 h，正常組不予特殊處理，模型組予以10 ng/ml的TGF-β1處理48 h；丹參酮 Ⅱ A組在10 ng/ml的TGF-β1基礎(chǔ)上加入最佳濃度丹參酮 Ⅱ A處理48 h。

1.2.2CCK-8法篩選丹參酮ⅡA藥物最佳濃度 將HK-2細(xì)胞按每孔1×104個(gè)/100 μl接……