白楊素對5-氟尿嘧啶誘導人肝癌Bel-7402細胞凋亡的增敏機制研究*

宋秀道，毛晨梅，馬錦

（1.南京中醫藥大學附屬蘇州醫院，江蘇 蘇州 215009；2.蘇州大學附屬兒童醫院 藥劑科，江蘇 蘇州 215025）

白楊素是黃芩、南棗酸及木蝴蝶等中藥的活性成分，也是一種廣泛存在于蜂膠、蜂蜜、西番蓮藍莓及其他膳食植物提取物中的黃酮類化合物，具有多種藥理作用，且不良反應小，毒性低[1]。在多種腫瘤細胞系和動物腫瘤模型中，白楊素具有抗腫瘤與化療增敏作用[2-3]。本研究通過白楊素增強5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）對人肝癌Bel-7402 細胞凋亡的誘導作用，提高5-FU 化療的敏感性，減少5-FU 的使用量與毒副反應，探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑 人肝癌Bel-7402 細胞株由蘇州大學生命科學學院惠贈，白楊素（純度99%）和5-FU（純度99%）購自北京百靈威科技有限公司，MTT 購自美國Sigma 公司，BCA 蛋白濃度測定試劑盒、二甲基亞砜（dimethylsurfoxide,DMSO）、胎牛血清及β-actin 單克隆抗體購自上海碧云天生物技術有限公司，DMEM 培養液購自美國Gibco 公司，0.25%胰蛋白酶液購自上海閃晶生物公司，Annexin V-FITC 凋亡試劑盒購自南京凱基生物科技發展有限公司，碘化丙啶（propidium iodide,PI）染液購自美國Sigma 公司，苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF）裂解液購自上海源聚生物科技有限公司，ECL Plus 超敏發光液購自北京Solarbio 公司，山羊抗兔二抗購自美國CMCTAG 公司，B 細胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相關X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、Bcl-2 相關死亡啟動因子（Bcl-2 associated death promoter,Bad）及半胱氨酸蛋白酶蛋白-3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3）抗體購自美國Cell Signaling Technology 公司。

1.1.2 儀器 全自動酶標儀（550 型）和垂直電泳儀（Mini-P3）購自美國Bio-Rad 公司，MoFlo XDP型超速流式細胞分選系統購自美國Beckman Coulter公司，DYCZ-40B 型轉膜儀購自北京六一儀器廠，Centrifuge 5810R 冷凍高速離心機購自德國Eppendorf公司，AlphaImager HP 化學發光成像系統購自美國ProteinSimple 公司。……