熱休克蛋白65對小鼠潰瘍性結腸炎的作用機制研究*

李小余，王莎，董穎，馬旭東，王偉偉，韓江余，邵圣文

（湖州師范學院醫學院 微生物與免疫學研究所，浙江 湖州 313000）

炎癥性腸病（inflammatory bowel disease,IBD）在臨床上包括2 個獨立的疾病，即潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis,UC）和克羅恩病（Crohn's disease）[1]。目前關于IBD 的病因尚不很清楚，較為普遍的看法是遺傳易感性、免疫異常、腸道菌群共同參與IBD 發病。UC 發病在我國逐年呈上升趨勢[2-3]。有學者認為，UC屬于自身免疫病范疇，患者自身免疫反應異常是UC發病的重要因素[4]。UC 疾病具有易復發、易慢性化的特點，在臨床上易演變成慢性遷延性疾病，給臨床治療帶來困難。目前還沒有完全治愈UC 的藥物。關于UC 治療藥物和方法的研究一直為臨床所重視。有研究指出，熱休克蛋白（heat schock protein,HSP）家族成員之一的HSP65 蛋白具有免疫調節功能[5]。本研究探討HSP65 蛋白是否通過調節性T 細胞（regulatory T cells,Treg）對UC 小鼠產生免疫調節作用，從而抑制小鼠腸道炎癥反應，使得小鼠UC 疾病得以緩解，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物與試劑

68 只C57BL/6 小鼠，雄性，8 周齡，體重18～20 g，合格證編號201703199，購自常州卡文斯實驗動物有限公司[許可證SCXK（蘇）2016-0010]。PE 標記的抗小鼠CD4 單抗（cat100407）、APC 標記的抗小鼠FoxP3單抗（cat137221）、PE/Cy7 標記的抗小鼠CD25 單抗（cat101915）、FITC 標記的抗小鼠CD3 單抗（cat100305）為美國Biolegend 公司產品。HSP65 蛋白為本實驗室自行制備。細胞流式分析采用美國BD 公司的FACS Canto流式細胞儀，數據分析應用FlowJo 軟件。

1.2 UC 小鼠模型復制

隨機選取62 只C57BL/6 小鼠，適應性飼養3 d 后開始模型復制，每天給予3.5%葡聚糖硫酸鈉（DSS，相對分子質量36～50 kD）的滅菌水自由飲用，連續飲用7 d，第8 天起按無特定病原體（SPF）級要求繼續飼養14 d，從存活小鼠中隨機取2 只處死，取結腸組織行病理檢查，結合小鼠UC 疾病活動指數（disease activity index,DAI）評分，驗證UC 小鼠模型復制成功。……