異常糖鏈糖蛋白檢測對甲狀腺癌診斷意義的研究

徐 陽

近年甲狀腺癌發病率逐年攀升且發病年齡相對年輕［1，2］。 早期甲狀腺癌無明顯癥狀或體征，多在查體中以甲狀腺結節的形式發現，甲狀腺結節良惡性的判斷直接影響患者的治療方式及具體術式的選擇［3，4］。目前臨床雖有超聲檢查及細針穿刺抽吸活檢等檢測方法，但部分患者仍因不能確定病變性質而需要密切隨訪甚至選擇手術切除以避免漏診或是延誤治療，這增加了患者的心理負擔和身體創傷，因此尋找腫瘤標志物來協助判斷甲狀腺結節的良惡性具有重大意義。異常糖鏈糖蛋白（tumor abnormal protein，TAP，又稱腫瘤異常蛋白）是細胞惡變時，癌基因和抑癌基因突變后所表達的異常糖蛋白和鈣-組蛋白復合物［5］，隨著患者體內癌細胞異常增殖，TAP被釋放進入血液，并較多的存在于外周血液中［6，7］。TAP檢測技術將外周血液中二十余種與腫瘤相關的異常糖鏈蛋白一次性組合檢測［8，9］，對惡性腫瘤具有很高的敏感性和準確性，已廣泛應用于消化系統、乳腺及婦科等惡性腫瘤的篩查和診斷中，但在甲狀腺癌診斷中的應用少有報道，該研究通過對比甲狀腺良性結節和甲狀腺癌患者的TAP檢測陽性率，探討TAP檢測在甲狀腺癌診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取筆者所在醫院2017年10月—2018年7月因甲狀腺結節來院診治的167例患者為研究資料，其中男33例，女134例；年齡13～69 歲，平均（48.19±11.68）歲。隨機將其分為兩組：甲狀腺癌組及甲狀腺良性結節組。門診或術前將TAP檢測作為輔助檢查之一，經術后病理證實為甲狀腺癌的93例患者為甲狀腺癌組，其中男19例，女74例，年齡13～68歲；經超聲檢查、細針穿刺抽吸活檢、多次隨訪等方法或術后病理證實的甲狀腺良性結節74例患者為甲狀腺良性結節組，其中男14例，女60例，年齡19～69歲。經統計，兩組在年齡及性別上的差異并無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 檢測方法

1.2.1 采血與制片 取指端末梢的第一滴和第二滴新鮮全血，分別在載玻片上推成占玻片長度2/3以上的均勻血片，平放待干，共2張為檢測標本。干燥后的血片在溫度1～35℃、相對濕度不超過80%的環境下可以存放48 h。

1.2.2 加試劑與凝聚反應 取異常糖鏈蛋白檢測試劑盒 （凝集法）（浙江瑞生醫療科技有限公司）試劑上層液在每張血片上均勻滴加3滴（每滴約50μl），形成3個斑點（10～12 mm/Φ），平放靜置進行凝集反應（約需2 h左右）。

1.2.3 凝聚物觀察 在腫瘤異常蛋白檢測系統圖像分析儀（浙江瑞生醫療科技有限公司）下，用4x平場消色差物鏡，在顯示屏上依次掃描觀察血片標本的3個斑點，尋找特異形態的凝聚物，遇可疑圖像轉用高倍鏡分辨。

1.2.4 結果判定 采用雙盲方法，由病理科醫師對TAP結果進行判定，TAP陰性：凝聚物面積0～225μm2（圖1）；TAP陽性： 凝聚物面積≥225μm2（圖 2）。

1.2.5 敏感度、特異度及陽性預測值計算 敏感度=A/（A+C）×100%，特異度=D/（B+D）×100%，陽性預測值=A/（A+B）×100%。

圖1 TAP陰性：凝聚物面積138.264μm2

圖2 TAP陽性：凝聚物面積263.321μm2

1.3 統計學分析應用統計學軟件SPSS 20.0進行一般數據處理，率的比較采用單因素方差分析及卡方檢驗，取P＜0.01為差異具有極顯著性，有統計學意義。

2 結果

2.1 敏感度、特異度及陽性預測值經計算，敏感度為73.02%，特異度為97.56%，陽性預測值為98.92%，即，敏感度=92/（92+34）×100%=73.02%；特異度=40/（1+40）×100%=97.56%； 陽性預測值=92/（92+1）×100%=98.92%。

2.2 甲狀腺良性結節與甲狀腺癌患者TAP檢測結果比較甲狀腺癌組陽性92例，陰性1例；甲狀腺良性結節組陽性34例，陰性40例。甲狀腺癌患者TAP檢測凝聚物較大比率98.9%，明顯高于甲狀腺良性結節患者（45.9%），兩組差異明顯，具有統計學意義（χ2=62.443，P＜0.01）。

3 討論

甲狀腺結節是常見的甲狀腺疾病，其中約5%～15%為甲狀腺癌［3，10］。甲狀腺良性結節與惡性結節的治療及預后完全不同，準確及時的判斷甲狀腺結節的良惡性是醫患雙方共同的迫切愿望。目前超聲檢查和術前細針穿刺抽吸活檢雖廣泛應用于甲狀腺結節的良惡性判斷，但由于甲狀腺結節聲像圖多種多樣，惡性結節并無特異性表現，尤其對于較小結節超聲常難以做出精確判斷。術前細針穿刺抽吸活檢對甲狀腺癌的診斷具有較高的敏感度和特異度［11］，有報道稱其假陰性率最高達11%，假陽性率最高達7%，無法鑒別甲狀腺濾泡狀癌和甲狀腺濾泡細胞瘤［12］，另有約20%患者細針穿刺抽吸活檢后仍不能確定病變性質［13，14］。同時超聲檢查及細針穿刺抽吸活檢對甲狀腺結節良惡性的鑒別能力與檢查設備、超聲科醫師經驗、取材部位、病理科醫師經驗等息息相關［15］，因此人們希望尋找敏感度高、特異度強的腫瘤標志物來彌補上述缺陷。

蛋白質翻譯后糖基化修飾是人體細胞實現蛋白質多種功能的重要修飾方式之一，糖基化異常與腫瘤細胞的發生、發展、轉移及預后息息相關［16，17］。烏克蘭醫學科學院在1967年首創臨床常用糖基化蛋白標志物“甲胎蛋白”，異常糖鏈糖蛋白檢測即在此研究基礎上，利用細胞惡變時糖基化異常而產生的異常糖鏈糖蛋白即TAP來判斷腫瘤的發生、發展及預后，并逐漸成為新的研究熱點［18-22］。較多研究表明，TAP檢測對于惡性腫瘤患者的敏感度高。靳麗亞［23］通過研究發現惡性腫瘤患者的TAP檢測陽性率達90.63%，明顯高于陰性患者。裴志剛、成琳等［24，25］研究發現，乳腺惡性腫瘤患者的 TAP 檢測陽性率明顯高于乳腺良性腫瘤患者，而當乳腺癌合并腋下淋巴結轉移時，患者的TAP表達水平明顯升高。Liqing［26］對以肉眼血尿、超聲發現膀胱占位為主要臨床表現的87位患者進行TAP檢測，發現膀胱惡性腫瘤患者的TAP檢測陽性率達78.16%，因此認為TAP檢測有利于膀胱癌的診斷。該項研究發現甲狀腺癌患者TAP檢測陽性率達98.9%，甲狀腺良性結節陽性率僅為45.9%，兩者差異明顯，敏感度和特異度以及陽性預測值分別達73.02%、97.6%及98.92%。因此當難以判斷甲狀腺結節良惡性時，如果TAP檢測凝聚物較大，則結節性質為惡性的可能性更大，因此可以認為TAP檢測有利于甲狀腺癌的診斷。該研究中，有1例甲狀腺癌患者TAP檢測結果為陰性，說明對于TAP檢測結果陰性的甲狀腺結節患者，仍不能僅憑這一單一指標而排除甲狀腺癌。而部分甲狀腺良性結節患者TAP檢測呈陽性，且陽性率達 45.9%，高于施南峰等［20，27］報道的其他良性腫瘤患者的陽性率，進一步分析發現該次研究數據共有32例門診患者，診斷為甲狀腺良性結節而未收入院，32例患者TAP檢測陽性率為0，而實際工作中部分的門診患者在考慮為甲狀腺良性結節后未接受進一步TAP檢測，這些患者存在隨機性，因此甲狀腺良性結節患者的樣本量較少可能是導致上述結果較高的原因。

綜上所述，TAP檢測對甲狀腺癌的診斷具有一定的輔助價值，可作為篩查的一個補助指標，但對于甲狀腺癌篩查的意義以及與甲狀腺癌患者的病理性質、分期及預后的關系尚需進一步的研究。