阿爾茨海默病小鼠Wnt信號通路相關蛋白表達水平及意義*

陳方方，白楊，王萍

（新疆醫科大學第五附屬醫院 神經內科，新疆 烏魯木齊 830011）

既往研究[1-2]顯示，Wnt信號通路涉及多種在胚胎發育過程中的分化事件，其可調節中樞神經系統的多個方面。動物實驗[3]證明在17號染色體相關的家族性額顳癡呆兼有帕金森綜合征小鼠病程早期即有Wnt通路分子表達升高，而阿爾茨海默病（Alzheimer's disease,AD）患者腦組織中Wnt信號通路分子的表達及其在病理狀態下對海馬區突觸是否產生影響還未明了。本研究通過動物實驗探討Wnt信號通路相關蛋白β-連環蛋白（β-catenin）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、海馬區突觸前蛋白（Synapsin1）及海馬區突觸后蛋白95（PSD-95）在AD病理狀態下的表達。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級健康C57小鼠48只，購自北京華阜康生物科技有限公司，均在醫院實驗中心的SPF級條件下飼養，設置光照周期，相對濕度（70±5）%，恒溫（25±2）℃。所有操作流程遵循醫院動物實驗倫理委員會的相關倫理規范。

1.2 試劑與儀器

試劑：蛋白Marker（美國Thermo公司），β-catenin、GSK-3β抗體（英國Abcam公司），Synapsin1、PSD-95抗體（美國Santa Cruz公司），PVDF膜（美國Millipore公司），RIPA裂解液、一抗稀釋液（中國碧云天生物技術研究所），ECL發光試劑盒（美國Millipore公司）。儀器：Morris水迷宮儀器和分析軟件（中國醫學科學院藥物研究所研制），超凈工作臺（中國蘇州蘇凈集團安泰公司），JEM-1200EX電子顯微鏡（日本電子株式會社），電泳儀（中國北京六一儀器廠）。

1.3 分組方法

96只C57小鼠隨機分為實驗組和對照組，每組48只。實驗組為攜帶人淀粉樣蛋白前體蛋白（amyloid precursor protein,APP）Swedish 突變（K595N/M596L）和PS1 deltaE9突變的C57小鼠，以鼠朊蛋白（mouse prion protein,PrP）基因為啟動子，即為APP/PS1雙轉基因小鼠。實驗組在3月齡出現認知行為學變化，5月齡出現老年斑，12月齡有大量老年斑形成。……