細胞自噬調(diào)控顱內(nèi)動脈瘤血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化的體外研究①

袁廣勝 吳海東 陳勝利 李小梅 邵 楠 王紀斌 張 婷

(東營勝利醫(yī)院，東營257055)

血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)與其他類型的細胞如血管內(nèi)膜的內(nèi)皮細胞、心肌細胞和骨骼肌細胞等相比較，保留高度的可塑性[1]。在正常狀態(tài)下，VSMCs具有收縮和舒張血管、維持血壓平衡、調(diào)節(jié)血管張力和血流量等功能。當細胞周圍環(huán)境發(fā)生改變時，VSMCs發(fā)生可逆轉(zhuǎn)的表型轉(zhuǎn)化，由生理狀態(tài)下的收縮表型(分化表型)轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇?去分化表型)，由此獲得增殖、遷移及合成分泌大量細胞外基質(zhì)和促炎因子的能力[2]。VSMCs表型轉(zhuǎn)化是細胞自我修復的機制，同時也成為新生內(nèi)膜形成和管腔狹窄的重要病理基礎。最新文獻報道顯示VSMCs和VSMCs表型轉(zhuǎn)化在顱內(nèi)動脈瘤(intracranial aneurysms，IAs)的形成、進展和破裂中發(fā)揮重要作用[1,3,4]。IAs的形成是血流動力學因素以及一系列復雜的生物學反應所引起的腦血管瘤樣突起，人群平均患病率1%～5%，高風險人群為19%[5]。IAs破裂是引起自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血的首位原因，致殘率和致死率高達 25%～50%，嚴重威脅人類生命和健康[6]。目前，IAs臨床治療主要包括手術(shù)治療和血管介入治療，尚未發(fā)現(xiàn)有效的藥物。因此，深入闡述IA的分子生物學機制對于提供有效的藥物靶點至關(guān)重要。本研究以體外培養(yǎng)的VSMCs為研究對象，揭示流體切應力對VSMCs表型轉(zhuǎn)化的影響及相關(guān)的分子機制。

1 材料與方法

1.1 材料 DMEM低糖培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基Opti-MEM、胎牛血清及胰蛋白酶(美國Gibco公司產(chǎn)品)，實時熒光定量PCR試劑盒(TaKaRa公司)，兔抗大鼠LC3、Beclin-1多克隆抗體(Sigma 公司)，兔抗大鼠β-actin 單……