人CD4+CD25-CD45RA+T細胞和CD4+CD25-T細胞誘導獲得iTreg細胞的方法學研究①

張少鵬 高 驥 干曉杰 鞠 崢 古 鑒 呂 凌

(南京醫科大學第一附屬醫院肝膽中心，南京210029)

CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(regulatory T cells,Treg)是一類特異性表達Foxp3的CD4+T細胞亞群，在誘導移植術后免疫耐受和維持體內免疫穩態中極為重要[1,2]。自1995年Sakaguchi 等首次報道Treg以來，越來越多的研究表明Treg與腫瘤、自身免疫性疾病如類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡等、移植物抗宿主病、慢性感染等疾病狀態的發生、發展密切相關[3-5]。目前關于Treg過繼療法治療某些疾病已經取得了積極的進展，但是體外無法直接獲得足夠數量的nTreg用于多次大量的細胞回輸。為了解決這一問題，近年來如何在體外獲取誘導性調節性T細胞(induced regulatory T cells,iTreg)備受關注，我們先前研究發現全反式維甲酸可以促進CD4+CD25-T細胞(conventional T cells,Tcon)誘導生成iTreg，CD39+T細胞誘導生成的iTreg表現出更強的免疫抑制能力[6,7]。國內外多個團隊在體外采用CD4+CD25-T 細胞進行誘導獲取iTreg,其中姚智團隊報道稱在第6天iTreg產率最高，可達41.08%[8-10]，但是這樣的產率仍無法滿足細胞治療所需的數量，而且iTreg純度及免疫調節能力對細胞治療效果極為重要。

CD4+CD25-CD45RA+T細胞又稱naive T細胞，其在外周血中的占比遠高于nTreg細胞，也可在TGF-β、IL-2和CD3/CD28磁珠共刺激下誘導生成效應iTreg[11]，目前關于采用CD4+CD25-T細胞或CD4+CD25-CD45RA+naive T細胞進行iTreg誘導的比較尚無報道。本實驗旨在對比兩種細胞亞群誘導iTreg的產率及誘導出的iTreg的功能差異，為后續iTreg的誘導和細胞治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞提取 自南京醫科大學研究生志愿者提供的外周血中提取細胞，所有實驗操作遵循南京醫科大學倫理委員會批準的操作原則。……