MAPK4敲除對內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的影響①

冒 靈 胡 琳 劉士明 褚風(fēng)云 賈 力 陳 超 徐 林

(遵義醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)教研室暨貴州省基因檢測與治療特色重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遵義563000)

急性肺損傷(Acute lung injury，ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome，ARDS)是以肺部急性炎癥為特征的一種嚴(yán)重的炎癥疾病，是敗血癥、出血性休克、嚴(yán)重創(chuàng)傷等危重疾病的并發(fā)癥[1-3]。盡管多種治療策略如干細(xì)胞治療、細(xì)胞因子治療和激素類治療被應(yīng)用于ALI的臨床研究中，但近年來ALI的發(fā)生率和死亡率仍居高不下[4-6]。這些治療策略在臨床上應(yīng)用效果受限的一個主要原因就是我們對ALI發(fā)生的分子病理機(jī)制仍未明確了解。近年來研究發(fā)現(xiàn)，絲裂原活化蛋白激酶4(Mitogen-activated protein kinase 4，MAPK4)作為非典型MAPK家族分子的成員之一，參與機(jī)體多種生理、病理過程，如免疫應(yīng)答、腫瘤生成[7-9]。然而，MAPK4是否參與肺部疾病(如ALI)的病理發(fā)生進(jìn)程還未有文獻(xiàn)報道。因此，本研究擬利用MAPK4-/-小鼠，建立LPS(脂多糖)誘導(dǎo)的小鼠ALI模型，觀察MAPK4敲除對小鼠ALI病理損傷的可能影響，并探討其可能機(jī)制，為后續(xù)臨床治療新策略的提出提供重要的前期實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 7～10周C57BL/6背景的SPF級WT和MAPK4-/-小鼠；LPS(Sigma)；顯微鏡(Olympus)；C1000 Thermal cycler熒光定量PCR儀、S1000 Thermal cycler PCR儀、Western blot電泳儀、Bio-Rad ChemiDocTMMP imaging System(Bio-Rad)；RNAiso Plus、Prime Script RT Reagent Kit、SYBR Premix Ex TaqⅡ(×2)(TaKaRa)；4%多聚甲醛、三氯甲烷、異丙醇(重慶川東化工公司)；PCR引物(生工生物工程有限公司)，見表1；兔抗鼠AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、GAPDH一抗(Cell Signaling Technol-ogy)，兔抗鼠MAPK4一抗(Abcam)；HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗(碧云天生物技術(shù)有限公司)；全蛋白提取試劑盒(凱基生物技術(shù)有限公司)；BCA蛋白定量試劑盒、抗體稀釋液(Solarbio)；PVDF膜(Millipore)。

1.2 方法

1.2.1 對小鼠進(jìn)行生存分析 按照15 mg/kg LPS的劑量對小鼠進(jìn)行腹腔注射，觀察并記錄兩組小鼠生存情況。……