miR-21調控TIMP-3影響LPS誘導下RAW264.7細胞中MMP-2和MMP-9表達①

陳 翔 黃 瑩 龍春藝 廖品琥

(右江民族醫學院附屬醫院呼吸科，百色533000)

膿毒癥是感染引起的全身性炎癥反應綜合征，其發病率高，病死率高，已成為重癥加強病房面臨的首要問題[1]。膿毒癥的主要機制為過度激活的炎癥反應及伴隨的免疫功能抑制。目前缺乏有效治療膿毒癥的手段，因此人們嘗試以免疫調節方式治療膿毒癥。

巨噬細胞通過趨化、遷移，到達受損部位并釋放炎癥介質參與調節膿毒癥免疫反應[2]，其具體機制尚未完全闡明。基質金屬蛋白酶(Matrix metallopro-teinase，MMPs)是一類可以降解細胞外基質(Extra-cellular matrix，ECM)的金屬蛋白酶，其中MMP-2、MMP-9可以通過分解ECM的主要成分Ⅳ型膠原參與ECM重塑，并進一步影響巨噬細胞趨化、遷移和免疫功能的調節，但具體機制尚未闡明[3]。miRNA是一類非編碼調控RNA，其中miR-21可以通過調控ECM相關基因參與膿毒癥心臟損傷，然而miR-21在巨噬細胞ECM重塑中的作用和潛在機制尚不清楚[4]。

迄今為止，尚無關于miR-21和MMP-2、MMP-9在巨噬細胞中表達水平及機制的明確報道。本研究通過探討miR-21對LPS刺激下RAW264.7細胞中MMP-2、MMP-9表達的影響，進一步研究miR-21的可能調控機制，為臨床診斷和治療膿毒癥提供新策略。

1 材料與方法

1.1 材料 RAW264.7細胞從上海中國科學院細胞庫購買。超微量紫外分光光度器(德國 Beckman 公司)，實時熒光定量聚合酶鏈反應儀、Western電泳儀、Western轉膜儀(美國 Bio-Rad公司)，酶標儀(Thermo fisher scientific公司)，全自動凝膠成像系統 JS-680B(上海培清科技有限公司)。MMP-2、MMP-9 ELISA試劑盒(美國R&D公司)，IL-6、TNF-α ELISA試劑盒(南京建成公司)，PCR引物、miRNA提取試劑盒、反轉錄試劑盒和熒光定量試劑盒(北京天根科技公司)，抑制劑、模擬物和對照物(上海吉碼公司)，MMP-2、MMP-9和TIMP-3一抗(美國Abcam公司)。……