不同炮制方法對黨參化學成分及產品質量的影響

陳 皓, 王 瑞, 董敬遠, 邢 浩, 賈明璐, 陳雪平

(漯河市中心醫院,河南 漯河462000)

黨參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.為臨床常用補益中藥材,性味甘、平,主歸肺脾二經,具有補中益氣、滋脾養肺等效果,臨床多用于脾胃虛弱、體倦無力、口渴少食、中氣不足、潤肺化痰、解毒平肝等［1-2］。關于黨參的歷史記載較多,《綱目拾遺》 稱其具有益肺氣、治肺虛、補血等作用, 《本草從新》 中提到其“補中益氣,和脾胃,除煩渴”［3］。近年來研究顯示,黨參在提高機體免疫力、增強機體造血功能、調節機體腸胃蠕動、改善血液循環等方面具有良好效果,而且含有多種人體必需的氨基酸及微量元素,可作為人參理想的替代品［4］,2010 年版《中國藥典》 中共收錄黨參、素花黨參、川黨參3 個品種,稱其“補中益氣,健脾益肺,用于脾肺虛弱,氣短心悸,食少便溏,虛喘咳嗽,內熱消渴”。中藥炮制是中藥材應用于臨床治療前或制備成各種劑型前需要進行的加工過程,有助于降低甚至消除藥物的烈性、毒性和不良反應,增強藥物作用,提高臨床療效,同時除去藥材中的雜質和非藥用部分,也有助于純凈藥材、保證質量及用量準確［5］。文獻中記載的黨參炮制方法較多,本實驗旨在研究不同炮制方法對黨參化學成分及藥材質量的影響,以期規范該藥材炮制工藝,提高其安全性及有效性,發揮醫用價值。

1 材料

Agilent 1200 高效液相色譜儀(美國Agilent 公司)；CQ-250 超聲波清洗器(上海躍進醫用光學器械廠)；Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm,昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52 旋轉蒸發儀 (上海亞榮生化儀器廠)；MP17C-KE 微波爐(美的公司)。

黨參由浙江省永康醫藥公司提供 (批號20120909),經江西中醫藥大學藥學系鑒定教研室專家鑒定為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的干燥根。黨參炔苷對照品(批號136085375,江西本草天工科技有限公司)。冰醋酸、乙腈、乙醇等試劑為色譜純(美國Sigma公司)。

2 方法與結果

2.1 炮制工藝

2.1.1 米制 將米置于鍋內,用文火加熱,噴灑純凈水少許,以米粘貼于鍋上為宜,待煙冒出時即加入切好的黨參段,翻炒至微黃色后取出放凉,將米粒去除。每100 kg 黨參使用20 kg 米。

2.1.2 酒制 將黨參置于米酒中拌勻,置于熱鍋中炒制,以近乎干燥為宜,取出放凉。每100 kg黨參使用1.5 kg 米酒。

2.1.3 土制 取灶心土置于熱鍋內炒制,以將土炒松為宜,后加入黨參片炒制至有香氣逸出,取出將土篩去后放凉。每100 kg 黨參使用30 kg 灶心土。

2.1.4 蜜制 取蜜用開水稀釋后與黨參片一同加入鍋中拌勻,文火加熱,炒制棕黃色且不粘手為宜,取出放凉。每100 kg 黨參使用20 kg 蜜。

2.1.5 炒制 將黨參片或黨參段置于鍋內,文火炒制,以黨參變為棕黃色、表面略有焦斑為宜,取出放凉［6］。

2.2 觀察指標 不同炮制方法對黨參中多糖、黨參炔苷含有量及產品質量的影響。

2.3 檢測方法

2.3.1 黨參炔苷含有量

2.3.1.1 色譜條件 Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流動相乙腈-1%冰醋酸；體積流量1 mL/min；柱溫25 ℃；檢測波長267 nm。

2.3.1.2 對照品溶液制備 準確稱量10 mg 干燥至恒定質量的黨參炔苷對照品,與流動相一同加入10 mL 量瓶中,定容,即得(1 mg/mL),待用。

2.3.1.3 樣品處理 將黨參磨成細粉,準確稱取5.000 g,加入50 mL 50%酒精,于60 ℃水浴鍋中水浴處理30 min 后微波爐加熱5 min,濾過,濾液減壓回流至干,加入10 mL 量瓶中,流動相定容后備用。

2.3.1.4 線性關系考察 依次取配制好的對照品溶 液 1.0、 5.0、 10.0、 20.0、 25.0 μL, 在“2.3.1.1” 項條件下進樣。 以峰面積為縱坐標(Y),樣品量為橫坐標(X) 進行回歸,得方程Y＝320.22X+9.365 (r ＝ 0.999 8), 在 0.02 ～0.50 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.3.1.5 精密度試驗 將對照品溶液連續3 d 在“2.3.1.1” 項條件下進樣6 次,測得黨參炔苷峰面積RSD 0.03%,表明儀器精密度良好。

2.3.1.6 穩定性試驗 將黨參制成供試品溶液,每隔1 h 在“2.3.1.1” 項條件下進樣,連續6 次,測得黨參炔苷峰面積RSD 0.08%,表明供試品溶液穩定性良好。

2.3.1.7 樣品含有量測定 對不同炮制方法下黨參進行分析,計算黨參炔苷含有量［7］。

2.3.2 多糖含有量

2.3.2.1 線性關系考察 準確稱取葡萄糖對照品12.1 mg 后加水溶解,并于100 mL 量瓶中定容至0.121 mg/mL, 吸 取 0、 0.2、 0.4、 0.5、 0.6、0.7、0.75 mL 于量筒中,蒸餾水定容至1 mL,加入2.0 mL 5%苯酚溶液后搖勻,滴加5.5 mL 濃硫酸,搖勻后置于60 ℃水浴鍋內30 min,在490 nm波長處測定吸光度。以溶液質量濃度為橫坐標(X),吸光度為縱坐標(A) 進行回歸,得方程為A ＝0.008 6X+0.014 5(r ＝0.999 1),在0.000 ～0.011 mg/mL 范圍內線性關系良好。

2.3.2.2 多糖含有量測定 準確稱取干燥至恒定質量的樣品23.5 mg,加水溶解,置于100 mL 量瓶中定容,吸取0.2 mL,按“2.3.2.1” 項下方法測定吸光度,根據標準曲線得到多糖質量濃度,計算含有量［8］。

2.4 檢測結果

2.4.1 對黨參質量、含水量及黨參炔苷含有量的影響 含水量測定選擇甲苯法,精確稱取不同炮制方法所得黨參50.0 g 進行蒸餾,測定其含水量。結果發現,不同炮制方法對黨參含水量及黨參炔苷含有量的影響不同,炮制后黨參質量及含水量依次為蜜制＞米制＞酒制＞土制＞炒制,黨參炔苷含有量依次為酒制＞米制＞炒制＞蜜制＞土制,見表1。

2.4.2 對黨參中多糖含有量的影響 不同炮制方法對黨參中多糖含有量具有較大影響,依次為酒制＞蜜制＞炒制＞土制＞米制。與生品比較,酒制和蜜制方式可增加該成分含有量,而炒制、土制、米制可導致其出現不同程度的降低,見表2。

3 討論

黨參炔苷作為黨參藥理作用最關鍵的化合物之一,是炮制過程中標志性檢測成分,通常以其作為衡量不同產地黨參質量的重要指標［9］,動物實驗已證實黨參炔苷對機體胃黏膜的保護具有重要作用［10］。不同產地黨參中黨參炔苷含有量具有較大差異,黃健等［11］測定山西五臺山黨參炔苷含有量為10.62%, 遼寧黨參為2.249%, 甘肅黨參為2.489%；時軍等［12］對來自內蒙古、云南、貴州等地的9 種黨參檢測發現,黨參炔苷含有量介于0.187～1.174 mg/g 之間,其中云南福貢產者最低,甘肅岷縣產者最高,均表明其受產地、種植環境等的影響較大。

表1 不同炮制方法對黨參質量、含水量及黨參炔苷含有量的影響Tab.1 Effects of different processing methods on C.pilosula quality，water content and lobetyolin content

表2 不同炮制方法對多糖含有量的影響Tab.2 Effects of different processing methods on the content of polysaccharides

研究表明,黨參在增強機體造血功能、改善機體腸胃運動、抗缺氧、抗血栓、改善血脂、提高機體免疫力、改善機體血液系統循環水平等方面均具有較為理想的臨床效果［13］。實驗發現,向戊四氮、硝酸士的寧處理后的小鼠腹腔注射一定劑量的黨參后,小鼠自由活動次數明顯減少,驚厥及死亡的時間顯著延長、例數明顯降低［14］；Fleischer 等［15-16］報道,黨參水溶性、脂溶性提取所得產物均對家兔中樞神經系統有一定的抑制作用,此外,黨參總堿還能有效緩解東莨菪堿對家兔記憶功能的損傷作用,對因東莨菪堿引起的家兔乙酰膽堿濃度下降具有抵抗作用。邱亞磊等［17］實驗結果表明,黨參對提高家兔機體血紅蛋白水平及紅細胞數量具有積極意義,并且未發現溶血癥狀；竇霞等［18］發現,給予大鼠一定劑量的黨參后機體內血紅蛋白水平明顯升高,與注射生理鹽水組具有明顯差異,進一步研究還發現黨參對大鼠血紅蛋白水平的調節作用與其對脾臟的刺激效果有關；目前臨床常將丹參與黨參聯合應用于心絞痛及冠心病患者的治療,對改善患者機體微循環、抑制機體血小板聚集及紅細胞硬化、避免機體血栓形成等均具有積極意義［19］。

黨參的水提醇沉溶液對大鼠實驗性胃潰瘍具有抵抗作用,對應激性、幽門結扎、慢性乙醇性胃潰瘍具有較好的預防及治療效果,且給藥量在10.0～80.0 g/kg 時具有明顯的量效關系［20］。黨參多糖對提高大鼠胃黏膜內PGE2a 水平具有積極意義,這也表明黨參能增強大鼠胃黏膜的屏障作用,提高胃黏膜細胞保護效果,抵抗大鼠胃黏膜損傷［21］。

研究表明,黨參配伍靈芝、黃芪對增強機體網狀內皮系統功能的效果超越卡介苗,機體網狀內皮系統吞噬功能增強可有效提高機體抗病能力,這與中醫治療“氣虛” 相吻合,從而達到“扶正” 效果［22］。鄒利等［23］通過體外培養人體淋巴細胞發現,高濃度黨參可促進人體淋巴細胞的有絲分裂,低濃度時則表現為抑制作用,表明它對淋巴細胞有絲分裂過程的影響。

不同炮制方法可導致中藥成分發生不同的質和量變化,同時改變具有生理活性及臨床治療作用的成分,從而導致其臨床效果的差異,炮制加工的方式、時間、環境溫濕度、輔料的選擇及用量等均會對中藥材有效成分的含有量產生影響［24-25］。中藥炮制的目的主要包括： (1) 通過合理的炮制方法促進其有效成分的溶出, 增強臨床治療效果；(2) 通過炮制加工降低中藥材毒性,以達到入藥要求； (3) 改變中藥材成分,突出或加強中藥材某一方面的作用； (4) 通過炮制加工降低中藥材儲存難度,延長儲存時間。中藥材炮制加工是以中醫藥理論為依據,并結合藥材本身性質及臨床辨證施治要求而施行的一項不可或缺的制藥技術,只有在繼承傳統炮制技術及理論的基礎上結合現代醫學制藥技術進行整理總結,制定科學規范的炮制質量檢測標準,探索并改進炮制工藝,才能有效推動相關技術的發展,提高臨床用藥的安全性及治療的有效性［26-28］。

研究發現,不同炮制方法對黨參質量、含水量、黨參炔苷含有量及多糖含有量等均具有不同程度的影響,炮制后黨參質量出現不同程度的降低,含水量變化也較為明顯,依次為蜜制＞米制＞酒制＞土制＞炒制；黨參炔苷作為黨參重要成分之一,含有量越高則表明黨參質量越好,治療效果越佳,經炮制后其提取率明顯升高,依次為酒制＞米制＞炒制＞蜜制＞土制。此外,酒炙及蜜制加工后黨參中多糖含有量較生品明顯升高,其原因可能與酒精可增加該成分溶解度有關；蜜制一方面可增加中藥材中多糖含有量,另一方面也不排除蜜作為輔料對該成分含有量的影響,這與高歡等［29］觀點一致。

結合現有文獻可知,蜜制黨參可增強中藥材補中益氣的效果；米制黨參焦香味較為濃厚,有助于增強中藥材益氣健脾的功效；土制黨參和胃健脾效果明顯。因此,臨床用藥時不僅要考慮到不同炮制方法對黨參化學成分的影響,還應關注其療效,根據治療目的選擇合適的炮制品。