Survivin與COX-2在腮腺良惡性多形性腺瘤中的表達及意義

喬 柱 趙 虎

多形性腺瘤（pleomorphic adenoma，PA）又被稱做混合瘤（mixed tumor），最常見于腮腺組織，為唾液腺疾病中最為常見的一種良性腫瘤，但該腫瘤可發生惡變，且隨著病程增長惡變幾率逐漸增大。根據WHO（2017）涎腺腫瘤分類標準，腮腺組織中的惡性多形性腺瘤主要為癌在多形性腺瘤中（carcinoma ex pleomorphic adenoma，ca ex PA），約占所有涎腺腫瘤的12%[1]。統計結果顯示90%以上的惡性多形性腺瘤是因多形性腺瘤惡變所導致，并且其預后比常見的其它涎腺腫瘤較差[2]。

近年來的實驗研究發現細胞增殖與凋亡的平衡失調成為腫瘤發病的重要機理，Survivin 蛋白和COX-2 蛋白都具有細胞凋亡抑制、血管生成參與、細胞增殖促進等生物學功能。已有研究表明Survivin和COX-2 在腺源性腫瘤表達機制及陽性結果存在相關性，在結直腸癌[3]、口腔鱗癌[4]、胃癌[5]、乳腺癌[6]等均有報道。本研究通過對Survivin 及COX-2 免疫組化中陽性表達程度的檢測，分析其與腮腺良、惡性腫瘤的關系。

資料和方法

1.臨床資料與組織標本：實驗組織收集來源于保定市第一中心醫院2014年7月～2017年10月病理科存檔的腮腺組織的良、惡性多形性腺瘤的蠟塊標本共46 例，其中良性組織24 例，惡性組織22例；另取正常腮腺組織標本20 例。所有病例臨床資料充足，病理學診斷明確，取材前無其他頭頸部腫瘤史且無放化療史，石蠟包埋組織完整。

2.試劑：鼠抗人Survivin 單克隆抗體（北京博奧森生物技術有限公司）；鼠抗人COX-2 單克隆抗體（北京博奧森生物技術有限公司）；濃縮型DAB 顯色試劑盒（天津灝洋生物制品科技有限公司）。

3.方法：采用免疫組化SP 二步法檢測各個分組每個標本中Survivin 和COX-2 的表達情況。用PBS代替一抗做陰性對照。

4.結果判定與統計：將細胞中出現棕黃色或棕褐色顆粒標記作為陽性細胞。由經驗豐富的兩位病理科醫師在電鏡高倍視野下觀察，采用雙盲法閱片，將每個視野下以100 個細胞計數，以陽性細胞率和陽性細胞染色深淺強度（-，+，++，+++）進行細胞陽性表達的評定。

統計學處理：Survivin 和COX-2 陽性表達情況均采用SPSS 22.0 軟件進行統計處理，計數資料應用百分率（%）表示，采用Fisher 精確概率分析，以P＜0.05 作為差異有統計學意義。

結 果

1.Survivin 蛋白表達特征及結：Survivin 在腺管樣的導管上皮細胞及粘液樣組織中常見表達，細胞漿與/或細胞核中可見棕褐色顆粒狀的陽性表達。正常腮腺組織中陽性表達可見于少許分泌管上皮細胞外側的肌上皮細胞核、基底細胞層、小葉間導管中。Survivin 在正常腮腺組織組、腮腺多形性腺瘤組和惡性多形性腺瘤病組中的陽性表達率分別為：5%、58.8%和95.5%，各組之間有顯著差異，見表1。

表1 Survivin 陽性表達情況

表2 COX-2 陽性表達情況

2.COX-2 蛋白表達特征及結果：COX-2 蛋白免疫組化的陽性表達定位在腺瘤細胞的細胞質中，偶爾可見于細胞膜和細胞核中，實驗各組中COX-2 蛋白均有表達，鏡下可觀察到表達情況有所不同，惡性多形性腺瘤組陽性表達較強。COX-2 陽性表達在正常腮腺導管上皮細胞膜中也可尋及。正常腮腺組織、良性多形性腺瘤、惡性多形性腺瘤中的COX-2 陽性表達率分別為55%、79.2%和90.9%。三組之間經fisher 百分比對比檢驗具有顯著差異性，見表2。

討 論

腮腺多形性腺瘤主要為唾液腺上皮源性腫瘤，乃涎腺腫瘤在臨床中最為常見的一種，占涎腺良性腫瘤的87%以上[7]。腮腺多形性腺瘤臨床治療中以手術切除方法為主，然而有臨床術后統計占3%左右的病例出現復發情況，反復復發的患者癌變概率又顯著增加[8]。目前專家們針對多形性腺瘤惡變的原因以及良惡性之間的關系已經進行了許多實驗和研究，以期待能早期診斷或干預腮腺良惡性多形性腺瘤的發生及發展。

Survivin 蛋白又被稱作生存素，是凋亡抑制蛋白家族中的一位成員，于1997年被Ambrosini 等[9]首先發現，是目前為止證實的具有最強功能凋亡抑制的因子。Survivin 蛋白的功能機制比較復雜，存在抑制細胞的凋亡以及參與調控腫瘤細胞周期的雙重作用，同時已證實其在正常分化組織中幾乎沒有表達，而在惡性早期胚胎組織及腫瘤組織中則多存在高表達的典型特點[9]，使得該因子同腫瘤細胞發生發展、增殖分化以及惡性變的關系成為目前實驗中研究的熱點。梁永強等[10]研究發現Survivin 陽性表達的多形性腺瘤病例，多數為細胞增生活躍且存在包膜邊緣浸潤者，預示著多形性腺瘤中存在Survivin 表達病例具備惡性生物學傾向。本實驗研究發現Survivin蛋白陽性表達主要見于癌組織細胞的胞漿和/或胞核，在惡性多形性腺瘤組存在有高度表達（陽性率95.5%），多形性腺瘤組中表達較高（陽性率58.8%），提示Survivin 蛋白的表達與多形性腺瘤的增殖活性有關。以上組間對比結果經分析有統計學意義（P＜0.05）表明了Survivin 在良、惡性多形性腺瘤的表達具有顯著性差異，這與王旭等[11]研究Survivin 在良、惡性涎腺多形性腺瘤中陽性表達分別56%及100%基本相符合。COX-2 又被稱為前列腺素內過氧化物合成酶，乃催化生成前列腺素重要活性物質的關鍵限速酶。COX-2 蛋白存在細胞凋亡抑制，細胞增殖促進，新生血管發生，阻礙細胞周期，腫瘤轉移促進等的生物學功能。向國林[12]等研究COX-2 在多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤中的表達情況中發現，在初發多形性腺瘤組、復發多形性腺瘤組和惡性多形性腺瘤組中的陽性表達率呈逐漸增高趨勢，并且明顯高于正常腮腺組。提示COX-2 與多形性腺瘤腫瘤細胞的增殖分化相關，參與了多形性腺瘤的發生、復發及惡變過程。本實驗中COX-2 蛋白在腮腺正常組織、多形性腺瘤、惡性多形性腺瘤各組中表達分別為55.0%、79.2%、90.9%各組之間有顯著性差異（P＜0.05），具有統計學意義，代表COX-2 在涎腺多形性腺瘤中的良惡性表達呈正相關性。王旭等[11]研究COX-2 蛋白在良、惡性涎腺多形性腺瘤中陽性表達分布情況相符合，提示COX-2 與腫瘤的細胞增殖分化的密切相關性，表明參與了多形性腺瘤的發生及惡變過程。

本研究結果提示Survivin、COX-2 的表達與腮腺多形性腺瘤的癌變病程進展相一致，均有可能成為今后涎腺腫瘤分化發展的一項生物學指標。腮腺多形性腺瘤是一種臨界性腫瘤，該腮腫瘤中兩蛋白的高表達也表明了其潛在惡性傾向的可能，提示在腫瘤癌變的過程中存在有重要的作用。掌握Survivin、COX-2 的表達與定位特點，有可能為腮腺良、惡性多形性腺瘤的鑒別診斷起到一定作用，并為其臨床治療及預后評估提供一定的理論支持。