早期動脈粥樣硬化患者的血清代謝組學研究*

呂曉鵬，張澤群，王春梅

（1.長春市人民醫院 康復醫學科，吉林 長春 130051；2.北華大學藥學院， 吉林 吉林 132013)

動脈粥樣硬化（atherosclerosis, AS）是脂質代謝紊亂造成的血管病變，為大多數心腦血管疾病的共同病理基礎[1]。冠狀動脈造影和動脈波傳導速度雖然可作為有效的檢測方法，但是由于價格昂貴、步驟繁瑣及造成創傷等原因難以大范圍應用[2]。代謝組學技術已成為眾多疾病早期診斷的重要依據[3-4]。本研究運用基于超高效液相色譜-四極桿飛行時間質譜技術的代謝組學方法尋找潛在的生物標志物，為AS早期臨床診斷提供依據。

1 資料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇、甲酸（色譜純，美國TEDIA試劑公司），超純水由Milli-Q超純水機（美國Millipore公司）制備。

1.2 儀器與設備

VaSera VS-1000無創動脈血管彈性測定儀（日本福田公司），Waters Acquity超高效液相色譜系統（美國Waters公司），Q-TOF SYNAPT G2 HDMS質譜儀（美國Waters公司，配有ESI離子源）。

1.3 方法

1.3.1 樣本收集選取2016年3月—2017年6月長春市人民醫院收治的24例健康志愿者（對照組）和27例AS患者（AS組），血液樣本由本院心內科和體檢中心提供。以頸-股動脈脈搏傳導速度＞ 9 cm/s為AS篩選指標[5]，患者均為男性，無其他疾病。

1.3.2 血清樣本的前處理清晨空腹狀態下采集血液樣本，3 000 r/min離心10 min，提取200μl血清加入800μl甲醇，渦旋1 min，4℃、1 200 r/min離心5 min，取上清液過0.45μm濾膜，4℃保存待測。

1.3.3 色譜條件選用Water ODS色譜柱（250.0 mm×4.6 mm，5μm），柱溫30℃，流動相A：甲醇；流動相B：超純水（0.1%甲酸）；流動相梯度：0～＜5 min，5%～＜20% A；5～＜10 min，20%～＜35% A；10～＜15 min，35%～＜60% A；15～20 min，60%～100% A。流速0.5 ml/min，進樣量為5μl。

1.3.4 液相條件電離源溫度：260℃；干燥氣（N2）流速：10 L/min；霧化器壓力：30 psig；裂解電壓：160 V；錐孔電壓：62 V；質量掃描范圍： 100～1 100 m/z。樣本測定前運用調諧液對質量軸進行校正。

1.3.5 質量控制取所有待測血清樣本各50μl，混合后作為質量控制樣本（quality control, QC）評價分析方法的穩定性和重復性，每8個待測定樣本中插入1個QC樣本。……