醛糖還原酶抑制劑對屋塵螨誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞炎癥因子的影響*

林玫，甄海寧，何芳，丁敏，陳亞雋，袁竹青，薛欣欣，鮑敏

[武漢大學(xué)附屬同仁醫(yī)院（武漢市第三醫(yī)院） 呼吸內(nèi)科，湖北 武漢 430060]

目前抑制核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor, NFκB）的活性已成為治療哮喘氣道炎癥的新靶點。醛糖還原酶（aldose reductase, AR）受到環(huán)境中的炎癥刺激后，表達(dá)明顯升高，繼而轉(zhuǎn)錄因子NF-κB被激活，其下游炎癥介質(zhì)釋放，促進(jìn)炎癥的病理過程[1]。醛糖還原酶抑制劑（aldose reductase inhibitors, ARI）可以阻斷依賴NF-κB的炎癥信號，提示ARI對炎癥反應(yīng)有調(diào)控作用[2]。但屋塵螨誘導(dǎo)氣道炎癥的影響研究甚少。為此，筆者擬探討ARI對屋塵螨誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞炎癥因子的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器Hettich UNIVERSAL 32R臺式離心機(jī)（德國Eppendorf公司），微量加樣器、微量加樣管均購自德國Eppendorf公司，垂直流超凈工作臺（上海智城分析儀器制造有限公司），恒溫二氧化碳培養(yǎng)箱（上海姚氏儀器設(shè)備廠），熱循環(huán)儀（德國Eppendorf公司），酶標(biāo)儀（德國Satorius公司），Nandrop分光光度計（德國Eppendorf公司），恒溫?fù)u床（美國New Brunswich Scientific公司），蛋白電泳儀（北京六一生物科技有限公司）。

1.1.2 主要試劑健康人支氣管上皮細(xì)胞16-HBE（武漢大風(fēng)生物科技有限公司），RPMI 1640培養(yǎng)液（美國Invitrogen公司）、胎牛血清（美國Invitrogen公司），屋塵螨抗原（Horsholm，Denmark，丹麥ALK公司），焦碳酸二乙酯（diethy pyrocarbonate，DEPC）（廣州索沃生物技術(shù)公司），RNA提取試劑盒（日本TaKaRa公司），逆轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV-RT）、引物均購自上海英駿生物工程有限公司，PCR試劑盒（日本TaKaRa公司），ELISA試劑盒（武漢谷歌生物科技有限公司），核蛋白提取試劑盒（南京凱基生物科技有限公司），醛糖還原酶抑制劑唑泊司他（Zopolrestat）（美國Pfizer 公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)將復(fù)蘇后的16-HBE細(xì)胞置于25 cm2培養(yǎng)瓶中，用含12%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，置培養(yǎng)瓶于37℃、5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱中，每日更換培養(yǎng)液?！?br>