吉西他濱對人舌鱗癌Tca8113細胞的放射增敏作用及其機制研究*

劉星驗，張斌，馬竟，陳健

（1.錦州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院 口腔頜面外科，遼寧 錦州 121000；2.葫蘆島市第二 人民醫(yī)院，遼寧 葫蘆島 125000）

舌癌是最常見的口腔癌[1]，有較強的局部浸潤性和轉移率高等特點，可導致咀嚼、言語和吞咽等功能失常，甚至有死亡的風險。舌癌對放射的敏感性不高，臨床上主要是手術治療，積極探討放療增敏的新方法成為研究熱點之一[2]。吉西他濱（Gemcitabine, GEM）是脫氧胞苷的水溶性類似物[3]，具有放射增敏作用強，毒副作用較小的特點[4]。本研究以GEM聯(lián)合放療作用于舌鱗癌Tca8113細胞，研究其對Tca8113細胞放射敏感性的影響及可能的作用機制，為舌癌的治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞舌鱗癌Tca8113細胞購于中國科學院上海細胞生物研究所。

1.1.2 試劑GEM購于美國ApexBio公司，DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶購于美國HyClone公司，二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide, DMSO）購于北京索萊寶科技有限公司，鏈霉素/青霉素（雙抗）、四甲基偶氮唑藍（ttihiazoly blue, MTT）購于上海碧云天生物技術有限公司，胎牛血清購于杭州四季青公司，流式細胞凋亡檢測試劑盒購于美國BD公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)Tca8113細胞在含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于37.0℃、5%二氧化碳CO2恒溫細胞培養(yǎng)箱中，定期傳代、換液，取對數期Tca8113細胞進行實驗。

1.2.2 MTT法測定取對數生長期的Tca8113細胞，消化、重懸、計數后置于96孔板內，5×103個/孔細胞，每組設3個復孔，測量重復3次。細胞貼壁后，加入不同濃度GEM（0.000、0.001、0.010、0.020、0.030、0.100及1.000μmol/L）完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后終止培養(yǎng)，每孔加入質量濃度為5 mg/ml的MTT 20μl，37℃條件下孵育4 h。棄上清液，每孔加入150μl DMSO。搖床上震蕩10 min，使用多功能酶標儀在490 nm波長處測定光密度（optical density, OD）值。……