二苯乙烯苷對HepG2細胞膽固醇含量的影響及其作用機制研究*

林昶，李玉平，齊建彤，鄭曙光，朱璨，柴藝匯，徐昌君，王和生，楊長福

（貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550002）

何首烏為蓼科植物何首烏的干燥塊根，作為中醫常用的一味傳統中藥，在我國有著悠久的應用歷史。現代研究表明，何首烏具有抗動脈粥樣硬化的作用[1]。該藥主要含3類有效成分：蒽醌類、二苯乙烯苷類及多糖類化合物。其中二苯乙烯苷有降血脂和抗動脈粥樣硬化（Atherosclerosis, AS）的作用，但其作用機制還不清楚[2-4]。本實驗以肝癌HepG2細胞作為研究對象，采用氧化性低密度脂蛋白（oxidation low density lipoprotein, ox-LDL）制作高膽固醇細胞模型，二苯乙烯苷干預后觀察膽固醇含量的變化，以及ATP結合盒轉運蛋白A1（ATP-binding cassette transporter A1, ABCA1）、ATP結合盒轉運蛋白G1（ATP-binding cassette transporterG1, ABCG1）和B族I型清道夫受體（Scavenger reptor class B type I, SR-BI）mRNA表達水平的變化，初步探索二苯乙烯苷降膽固醇的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

肝癌HepG2細胞（上海陸奧生物科技有限公司），0.25%胰蛋白酶（美國Gibco公司），青鏈霉素混合液（哈爾濱哈藥集團制藥總廠），高糖DMEM（美國HyClone公司），胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），總RNA提取試劑盒（日本TaKaRa公司MiniBEST Universal RNA Extraction Kit），cDNA鏈合成試劑盒（PrimeScriptTMRT reagent Kit with Gdna Eraser）、PCR酶（Premix TaqTM）、瓊脂糖及DNA Marker等購自寶生物工程（大連）有限公司，ox-LDL（北京索萊寶科技有限公司），膽固醇含量測定試劑盒（蘇州科銘生物技術有限公司），DL5和00 DNA Marker（北京康為世紀生物科技有限公司），油紅O染液（北京索萊寶科技有限公司），生工生物工程（上海）股份有限公司合成逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）擴增引物。見表1。

1.2 儀器與設備

MSL-3020型全自動高壓滅菌鍋（日本三洋有限公司），BSC 1800-Ⅱ-A/B3型超凈工作臺（上海瑞仰凈化裝備……