種公豬精液攜帶6種繁殖障礙性病原狀況調查

楊永能

（云南省楚雄州動物疫病預防控制中心，云南楚雄 675000）

豬繁殖障礙性疾病的存在給各地養豬業帶來了潛在的威脅和巨大的經濟損失。隨著養豬業的進一步發展，多病因的混合感染讓豬繁殖障礙病因越來越復雜，防治越來越困難。當前，導致豬群發生繁殖障礙性疾病的病毒性疫病主要有：豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬圓環病毒2型（PCV-2）、豬瘟（CSF）、偽狂犬病（PR）、豬細小病毒病（PP）、豬乙型腦炎（JE）等。公豬精液中存在這些疫病的病毒會給養豬業造成潛在的威脅。

云南省楚雄彝族自治州位于滇中腹地，東靠昆明市、西接大理白族自治州、南臨普洱市和玉溪市、北連四川省，土地面積2.84萬平方千米。楚雄州下轄10縣（市），分別為祿豐縣、南華縣、雙柏縣、姚安縣、元謀縣、武定縣、永仁縣、牟定縣、大姚縣和楚雄市，全州103個鄉鎮，2017年底全州常住人口達273.3萬人。2017年楚雄州生豬存欄277.3萬頭，出欄377萬頭，畜禽肉類總產量43.99萬噸；全州畜牧業總產值達114.91億元，占農業總產值的37.15%。

楚雄州動物疫病預防控制中心2017年對豬群中的豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬乙型腦炎病毒、豬細小病毒、豬圓環病毒抗體抽樣檢測，陽性率結果為：未檢出豬瘟病毒，豬偽狂犬病毒32.51%、豬乙型腦炎病毒64.77%、豬細小病毒26.97%、豬圓環病毒64.38%。采集180份豬脾、肺組織樣品進行豬瘟病毒、高致病性豬藍耳病病毒、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病毒核酸進行監測，檢出豬瘟病毒陽性樣品2份、高致病性豬藍耳病病毒陽性樣品1份、豬圓環病毒2型陽性樣品33份，未檢出豬偽狂犬病毒，陽性率分別為1.11%、0.56%、18.33%和0。

楚雄州轄區內目前有164個豬的人工授精改良站、1 242個本交改良站，2017年完成33.61萬胎豬的人工授精、15.62萬胎豬的本交。對當地1 500戶母豬養殖戶的2 120頭能繁母豬調查，發現受胎率為93.75%、平均窩產仔數為10.64頭、產仔成活率為94.49%。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源

2017年8月至2018年2月對楚雄州10個縣（市）分別選取5個對外豬精液供應站點，共50個種豬精液供應點，合計采集212份精液樣品進行檢測，分別是楚雄市56份、元謀縣10份、大姚縣20份、姚安縣10份、武定縣16份、南華縣14份、永仁縣16份、牟定縣16份、祿豐縣28份、雙柏縣26份。

1.1.2 試驗儀器

試驗過程中采用的儀器均由云南農業大學動物傳染病實驗室提供。

1.1.3 試驗試劑

RNA提取試劑盒，6×Loading Buffer購自大連寶生物；Bioteke細胞/組織基因組DNA和RNA提取試劑盒購自百泰克生物技術有限公司；Easy First-Strand cDNA Super Mix、2×TransTaq HiFi PCR Super Mix，TransTaq DNA Polymerase High Fidelity購自北京全式金生物技術有限公司；異丙醇、75%乙醇、瓊脂粉、TAE緩沖液、雙蒸水、氯仿等由云南農業大學動物醫學實驗教學中心預防獸醫學實驗室提供。試驗中所需的陽性對照選取了 PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2、JEV、PPV疫苗，均由楚雄州動物疫病預防控制中心和云南農業大學動物醫學院獸醫傳染病實驗室提供。

1.1.4 PCR引物合成

PCR檢測引物序列參照云南農業大學動物傳染病實驗室檢測所使用的引物序列，由昆明碩擎生物科技有限公司合成。

1.2 試驗方法

按照RNA和DNA提取試劑盒說明書提取精液中的RNA和DNA。采用RT-PCR和PCR法分別對提取的RNA和DNA進行目的基因片段擴增。取10 μL PCR擴增產物配制成體系后加樣到1.5%瓊脂糖凝膠（含0.2%EB）孔中，并在100 V電壓下電泳40 min，在凝膠成像系統上觀察結果，并拍照。

2 試驗結果

2.1 種公豬精液中6種繁殖障礙性病毒病原檢測結果

對來自云南楚雄州10縣（市）的212份精液樣品分別進行豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬圓環病毒2型（PCV-2）、偽狂犬病毒（PRV）、豬細小病毒（PPV）和豬乙型腦炎病毒（JEV）檢測。結果顯示，檢測出PRRSV陽性樣品16份，陽性率7.55%（16/212）；檢測出CSFV陽性樣品2份，陽性率0.94%（2/212）；檢測出PCV-2陽性樣品38份，陽性率17.92%（38/212）；檢測出PRV陽性樣品2份，陽性率0.94%（2/212）；未檢測出PPV和JEV陽性樣品（見表1）。

表1 6種繁殖障礙性病毒性病原檢測統計結果

2.2 不同地區檢測結果統計

由表2可知，大姚縣采集的20份樣品中檢測出14份攜帶PCV-2，檢出率為70%，檢出率最高；元謀縣的10份樣品中檢測出6份精液攜帶病毒（4份攜帶PCV-2、2份攜帶PRV），病毒檢出率為60%，且是唯一檢出PRV病毒的縣；祿豐縣的28份樣品中檢出16份攜帶PRRSV，病毒檢出率為57.14%，為唯一檢測出PRRSV的縣；雙柏縣的26份樣品中檢測出4份攜帶病毒（2份攜帶CSFV、2份攜帶PCV-2），病毒檢出率為15.38%，為唯一檢測出CSFV的縣；南華縣的14份樣品中檢出8份攜帶PCV-2，病毒檢出率為57.14%；武定縣的16份樣品中檢出4份攜帶PCV-2，病毒檢出率為25%；姚安縣的10份樣品中檢出2份攜帶PCV-2，病毒檢出率為20%；永仁縣的16份樣品中檢出4份攜帶PCV-2，病毒檢出率為25%；楚雄市的56份樣品中均未檢出攜帶病原；牟定縣的16份樣品中均未檢出攜帶病原。在此次采集的所有樣品中均未檢出JEV和PPV（見表2）。

3 討論與分析

3.1 PRRSV感染情況分析

從采集的212份樣品中檢測出PRRSV陽性樣品16份，樣品陽性率為7.55%。姜佳佳等[1]在2016年對廣西地區15個中小規模種豬場公豬精液進行PRRSV檢測，陽性率為48.39%。吳永剛[2]2013年對四川省6個地區豬場的126份公豬精液進行PRRSV檢測，陽性率為11.9%。趙謙等[3]2016年對云南部分地區規模化豬場的212份種公豬精液進行PRRSV檢測，陽性率為7.08%。對比可知，此次調查結果顯示PRRSV陽性率屬適中水平。但從地區分布來看，16份PRRSV陽性樣品均來自祿豐縣的精液樣品中，占該地區樣品數的57.14%；其他地區均未檢出PRRSV。從地理位置可知，祿豐縣是楚雄州連接云南昆明和四川的重要交通樞紐，生豬流通量較大，疫情情況較復雜。因此，需要加強祿豐縣的疫情監測工作，加強種豬精液質量安全檢測，及時淘汰攜帶PRRSV的種公豬，及時切斷傳染源是控制PRRS疫病傳播和流行的重要措施。

表2 不同地區檢測結果統計表

3.2 PCV-2感染情況分析

在212份豬精液樣品中檢測出PCV-2陽性樣品38份，占所有樣品數的17.92%，為所檢測的6種病毒中陽性率最高的1種。姜佳佳等[1]對廣西地區15個中小規模種豬場公豬精液進行PCV-2檢測，陽性率為3.23%。吳永剛[2]對四川省6個地區豬場的126份公豬精液進行PCV-2檢測，陽性率為2.38%。趙謙等[3]對云南部分地區規模化豬場的212份種公豬精液進行PCV-2檢測，陽性率為6.6%，此次調查結果顯示PCV-2陽性率（17.92%）處于較高水平。從區域分布來看，38份陽性樣品分別來自元謀縣、大姚縣、姚安縣、武定縣、南華縣、永仁縣、雙柏縣等7個縣，占楚雄州的70%。其中，大姚縣和南華縣PCV-2陽性率較高，分別為70%和57.14%。PCV-2在楚雄州陽性率較高且分布廣泛。主要是PCV-2在我國大多數豬場廣泛存在，致病率高，僅少部分豬表現臨床癥狀，目前尚未引起政府和生產企業的高度重視，且PCV-2未被列入楚雄州重大動物疫病防治和監測范圍。PCV-2可使豬群產生嚴重的免疫抑制，容易使感染豬并發或繼發其他病毒性疾病；此外PCV-2可通過精液垂直傳播，且斷奶仔豬對PCV-2最易感。因此，加強對PCV-2的監測及防治，及時淘汰帶毒種豬，切斷傳染源，開展PCV-2疫病凈化，對進一步提高養殖企業生產效率尤為重要。

3.3 CSFV感染狀況分析

212份精液中檢測出CSFV陽性樣品2份，占所有樣品數的0.94%。姜佳佳等[1]對廣西地區15個中小規模種豬場公豬精液進行CSFV檢測，陽性率為16.94%。吳永剛[2]對四川省6個地區豬場的126份公豬精液進行CSFV檢測，陽性率為3.17%。趙謙等[3]對云南部分地區規模化豬場的212份種公豬精液進行CSFV檢測，陽性率為3.77%。從總體看，此次調查結果顯示CSFV陽性率（0.94%）處于較低水平。從地區分布來看，2份CSFV陽性樣品來自雙柏縣，占地區樣品數的7.7%。其他地區均未檢出CSFV。CSFV作為養豬業危害較大的動物傳染病，政府將其作為重大動物疫病來監測和防治，但該病毒在養殖生產中依然零星存在，尤其在種公豬體內，且種公豬不表現出明顯的臨床癥狀，CSFV可通過精液傳播，給該病的防治和根除增加了困難。加強CSFV的監測，加強供精站點精液質量安全監管，及時消除傳染源，積極開展動物免疫，是根除該病的重要手段。

3.4 PRV感染狀況分析

212份精液中檢測出PRV陽性樣品2份，占所有樣品數的0.94%。姜佳佳等[1]對廣西地區15個中小規模種豬場公豬精液進行PRV檢測，陽性率為5.24%。吳永剛[2]對四川省6個地區豬場的126份公豬精液進行PRV檢測，陽性率為3.17%。趙謙等[3]對云南部分地區規模化豬場的212份種公豬精液進行豬PRV檢測，陽性率為3.3%。從總體看，此次調查結果顯示PRV陽性率處于較低水平。從地區分布來看，2份PRV陽性樣品來自元謀縣，占地區樣品數的20%。其他地區均未檢出PRV。雖然PRV陽性率較低，但在種豬精液中依然存在，該病通過精液傳播的風險較大，因此定期對豬群進行PRV疫苗免疫，全面開展PRV監測，及時淘汰陽性豬，能夠有效地控制和根除該病。

3.5 不同地區感染狀況分析

由調查結果可知，楚雄州種公豬精液病原檢出率最高的地區為大姚縣（20份樣品中14份攜帶PCV-2），其次為元謀縣（10份樣品中6份攜帶病毒）。種公豬精液病原檢出率最低的地區為楚雄市和牟定縣，病原檢出率均為0。通過實地調查及查閱各地畜牧科技推廣相關資料可知，大姚縣和元謀縣的豬人工授精站點數量分布較少，且供精站點大多以小規模個體養殖戶為主。楚雄市和牟定縣均為楚雄州生豬存欄數量較大的縣市，2地區豬人工授精站點分布較多，且供精站點多以中大規模生產企業為主，企業相互之間存在較強的市場競爭，精液品質直接影響企業效益。綜上所述，生產企業的規模與種豬精液品質安全有一定關系，中大規模生產企業更注重種豬精液的品質安全，小規模個體戶受制于生產技術和管理水平，種豬精液品質難以保障。一定區域內企業之間的市場競爭，有利于種豬精液品質的提高。