金銀花綠原酸提取物的抑菌作用研究

蘇悅 于海玲 邵錦瑩 袁怡雯 粟敏

[摘要]目的：金銀花綠原酸提取物的抑菌作用研究。方法：取大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌新鮮培養物接種至營養肉湯培養基，37℃培養18-24h;分別接種至三個營養肉湯瓊脂斜面固體培養基保藏，37℃培養18-24h;將這三種菌種接種到液體培養基中，進行振蕩培養，用移液槍移取100ul菌懸液用三角玻璃涂布棒均勻涂布于90mm的平板上，將含有28mg/ml綠原酸的濾紙片貼在已接種待檢茵的瓊脂平板上，在37℃培養3-5d，觀察菌種的生長情況，記錄數據，測量抑菌圈直徑。結果：同時采用紙片法，測試了金銀花綠原酸提取物的抑茵活性，結果發現其對大腸埃希茵、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑菌作用，抑菌活性強弱為大腸埃希菌>金黃色葡萄球菌>枯草芽孢桿菌。結論：金銀花綠原酸提取物對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑菌作用

[關鍵詞]金銀花綠原酸提取物 細菌 藥紙片 K-B法

綠原酸（Chlorogenic acid）是由咖啡酸（Caffeic acid）與奎尼酸（Quinic acid）組成的縮酚酸，異名咖啡單寧酸，化學名：3-0咖啡酰奎尼酸（3-O-Caffeoyl quinic acid），分子式：C16H1809，分子量：354.30，是植物體在有氧呼吸過程中經莽草酸途徑產生的一種苯丙素類化合物。綠原酸是一種重要的生物活性物質，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經系統等作用。中藥成分CRA/IRC廣泛存在于植物中，以金銀花，杜仲中的含量較高，具有廣泛的藥理作用，已有文獻報道其具有體外抗炎、抗菌及抗病毒作用：本研究通過提取金銀花有效成分綠原酸，檢驗綠原酸對常見三種控制菌的抑菌作用，以了解金銀花提取物綠原酸的抗菌效果，為金銀花抗菌藥用價值的開發奠定實驗理論基礎。

一、對象與方法

（一）實驗細菌

以大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌為實驗對象，將細菌培養于長沙醫學院生命科技樓二樓實驗房，培養箱中37℃恒溫培養。

（二）實驗內容

純度98%金銀花綠原酸提取物于冰箱（2℃）保存;取大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌新鮮培養物接種至營養肉湯培養基，37℃培養18～24h;分別接種至三個營養肉湯瓊脂斜面固體培養基保藏，37℃培養18～24h;將這三種菌種接種到液體培養基中，進行振蕩培養，用移液槍移取100ul菌懸液用三角玻璃涂布棒均勻涂布于90mm的平板上，將含有28mg/ml綠原酸的濾紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，在37℃培養1d，觀察菌種的生長情況，記錄數據，測量抑菌圈直徑，同法平行操作3次。

（三）觀察指標

將貼好藥紙片的平板置37℃培養3～5d后，用游標卡尺取抑菌圈直徑

（四）統計分析

用十字交叉法測量抑菌圈直徑，并觀察抑菌圈透明程度和邊緣整齊程度。3～5d后測量抑菌圈的直徑。實驗設3次重復。

二、結果

同時采用紙片法，測試金銀花綠原酸提取物的抑菌活性，結果發現其對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑菌作用，抑菌活性強弱為大腸埃希菌>金黃色葡萄球菌>枯草芽孢桿菌。具體見表1。

三、討論

金銀花具有清熱解毒、涼風散熱、抗病毒、保肝利膽等功能，是我國傳統的中藥植物。金銀花中的主要化學成分黃酮類、有機酸類、三萜皂苷類、揮發油等，其中主要活性成分有機酸中的綠原酸（Chlorogcnicacid）。綠原酸對大腸癌、肝癌和喉癌具有顯著的抑制作用，被認為是癌癥的有效化學防護劑;真菌感染是一種機會性感染疾病，它攻擊免疫低下宿主：研究發現，金銀花中綠原酸對枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果與慶大霉素相似：慶大霉素雖對一些致病菌等具有強抑菌作用，但它對人體有腎毒性、耳毒性、過敏反應等：因此，通過實驗提取金銀花有效成分綠原酸，檢驗綠原酸對常見五種控制菌的抑菌作用，以了解金銀花提取物綠原酸的抗菌效果，為金銀花抗菌藥用價值的開發奠定實驗理論基礎。