宮頸癌前病變合并HPV感染者炎癥因子及陰道微生態(tài)環(huán)境分析

尹清，孟凡玉，繆志海

（樂清市第二人民醫(yī)院，浙江 樂清 325608）

宮頸癌是較為常見的婦科惡性腫瘤，早期多表現(xiàn)為接觸性出血、陰道排液等，晚期以便秘、貧血、輸尿管梗阻以及尿毒癥等為主要表現(xiàn)[1]。其宮頸癌早期治愈率高達(dá)約90%，而晚期治愈率極低，死亡率極高。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)長(zhǎng)期的過程，宮頸癌前病變有發(fā)展為惡性腫瘤的可能。臨床研究顯示，約有95%的宮頸癌合并有高危型持續(xù)性的HPV感染[2]。炎癥因子具有免疫調(diào)節(jié)的功能，能夠影響、控制細(xì)胞的遺傳代謝，具有獨(dú)特的耐受機(jī)制以及高度敏感性，感染、創(chuàng)傷會(huì)影響炎癥因子的表達(dá)。陰道微生態(tài)環(huán)境具備免疫和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的功能，但在病理狀態(tài)下優(yōu)勢(shì)菌群大量減少，菌群失衡，微生態(tài)環(huán)境失調(diào)。近年來，臨床上對(duì)于宮頸癌前病變以及HPV感染的研究逐漸深入，免疫系統(tǒng)分析以及陰道微生態(tài)環(huán)境評(píng)價(jià)被廣泛應(yīng)用于臨床治療中[3]。本研究探討宮頸癌前病變合并HPV感染者血清炎癥因子變化及其陰道微生態(tài)環(huán)境變化，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年6月-2018年6月本院接收的80例宮頸癌前病變合并HPV感染者作為HPV組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)HC2基因雜交捕獲試驗(yàn)檢測(cè)確認(rèn)HPV感染，經(jīng)液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，宮頸活檢病理報(bào)告確診為宮頸癌前病變；（2）癌前病變分級(jí)為CINⅠ-Ⅲ；（3）3年以上規(guī)律性生活，已育或暫無生育需求；（4）未進(jìn)行過抗宮頸癌前病變治療，近2個(gè)月內(nèi)未服用過抗癌藥物，就診前3天未同房，就診時(shí)無陰道出血；（5）知悉并配合本研究，簽訂知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并心、肺等重要臟器功能障礙；（2）近3個(gè)月內(nèi)服用過性激素類藥物，近1個(gè)月服用過抗生素類藥物，近1周內(nèi)進(jìn)行陰道沖洗、藥物治療；（3）處于妊娠或哺乳期；（4）合并陰道炎、盆腔炎；（5）合并免疫系統(tǒng)疾病或服用免疫抑制類藥物；（6）患有精神障礙、無法配合完成治療。 HPV 組年齡 25-48 歲，平均（31.5±7.3）歲，其中CINⅠ25例，CINⅡ28例，CINⅢ27例。擇同期在本院體檢健康的女性80例作為對(duì)照組，年齡26-50歲，平均（31.4±7.4）歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審議批準(zhǔn)。

1.2 方法 （1）炎癥因子檢測(cè)，空腹12小時(shí)以上，次晨采集空腹靜脈血5mL，以2500r/min分離15分鐘，取其上清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)IFN-γ、IL-2、IL-4水平。檢測(cè)試劑盒均采購(gòu)于上海酶聯(lián)生物有限公司，所有操作均需嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。（2）陰道分泌物采集，在月經(jīng)期結(jié)束后5-7天內(nèi)采集標(biāo)本，采樣前3天內(nèi)不同房、坐浴或行陰道沖洗。擴(kuò)陰器充分暴露宮頸，無菌棉簽在陰道上1/3端近穹隆處旋轉(zhuǎn)粘取陰道分泌物10-20秒，以清晰見到棉簽上有分泌物附著為準(zhǔn)，半小時(shí)內(nèi)于LTS-V800陰道分泌物分析儀上檢測(cè)，儀器自動(dòng)讀取原裝配套陰道炎聯(lián)檢試劑卡的pH值、過氧化氫（H2O2）濃度。儀器拍照識(shí)別清潔度，手工顯微鏡下復(fù)核清潔度、菌群密集度、菌群多樣性，顯微鏡放大倍數(shù)為40×10。清潔度分級(jí)[4]：Ⅰ級(jí)為以陰道桿菌為主，膿細(xì)胞或白細(xì)胞0-5個(gè)/HP；Ⅱ級(jí)為部分陰道桿菌，膿細(xì)胞或白細(xì)胞5-15個(gè)/HP；Ⅲ級(jí)為少量陰道桿菌和上皮細(xì)胞，膿細(xì)胞或白細(xì)胞15-30個(gè)/HP；Ⅳ級(jí)為無陰道桿菌，膿細(xì)胞或白細(xì)胞15-30個(gè)/HP，清潔度Ⅰ/Ⅱ?yàn)檎＃?Ⅳ為異常。菌群密集度分級(jí)[5]：油鏡下觀察30個(gè)視野，觀察細(xì)菌分布、排列，直接判斷、分級(jí)，以油鏡下每個(gè)視野細(xì)菌平均數(shù)進(jìn)行判斷，Ⅰ級(jí)為細(xì)菌數(shù)量＜10；Ⅱ級(jí)為細(xì)菌數(shù)量10-99；Ⅲ級(jí)為細(xì)菌數(shù)量≥100；Ⅳ級(jí)為細(xì)菌積聚成團(tuán)或密集覆蓋，菌群密集度Ⅱ-Ⅲ為正常，Ⅰ/Ⅳ為異常。菌群多樣性分級(jí)[6]：Ⅰ級(jí)為菌群種類1-3種；Ⅱ級(jí)為菌群種類4-6種；Ⅲ級(jí)為菌群種類7-10種；Ⅳ級(jí)為菌群種類＞10種；菌群種類Ⅱ/Ⅲ為正常；Ⅰ/Ⅳ為異常。陰道pH值≤4.5為正常，＞4.5為異常[7]。H2O2含量≥2μmol/L時(shí)為H2O2（+），代表微生物功能正常；＜2μmol/L 時(shí)為 H2O2（-），代表微生物功能異常[8]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 選擇SPSS20.0軟件統(tǒng)計(jì)工具進(jìn)行數(shù)據(jù)對(duì)比分析，其中計(jì)量數(shù)據(jù)采用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 炎癥因子 HPV組IFN-γ、IL-2水平低于對(duì)照組，IL-4水平高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），詳見表 1。

表1 兩組炎癥因子水平比較（x±s，pg/mL）

2.2 陰道微生態(tài)環(huán)境 與對(duì)照組比較，HPV組清潔度、菌群密集度和菌群多樣性異常率較高，pH值＞4.5以及H2O2（-）占比均較高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。 詳見表 2。

表2 兩組陰道微生態(tài)環(huán)境指標(biāo)比較[n（%）]

3 討論

近年來，我國(guó)宮頸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增長(zhǎng)且不斷年輕化的趨勢(shì)，每年約有10萬宮頸癌新發(fā)病例，約占全球總數(shù)的20%[9]。HPV以及宮頸癌前病變，因其初期無特異性表現(xiàn)，較難明確診斷。炎癥因子作用于機(jī)體各個(gè)重要器官，是參與免疫應(yīng)答、執(zhí)行免疫功能的重要因子，當(dāng)感染HPV或發(fā)生宮頸癌前病變后，機(jī)體免疫下降[10]。陰道微生態(tài)環(huán)境是陰道最重要的防御系統(tǒng)，感染HPV、宮頸癌前病變可致陰道微生態(tài)環(huán)境失衡[11]。因此，對(duì)宮頸癌前病變合并HPV感染患者進(jìn)行免疫功能以及陰道微生態(tài)環(huán)境的檢測(cè)、能夠幫助宮頸癌前病變合并HPV感染的篩查，并指導(dǎo)治療。

炎癥因子在機(jī)體發(fā)生感染以及病變時(shí)，能夠快速有效地表達(dá)，炎癥因子的表達(dá)也能有效及時(shí)地反映患者的治療情況以及預(yù)后狀況[12]。IFN-γ作為炎癥以及免疫的重要介質(zhì)，具有激活巨噬細(xì)胞的功能，能夠有效抵抗病毒，在促進(jìn)Th1細(xì)胞繁殖分化的同時(shí)抑制Th2細(xì)胞，通過增強(qiáng)機(jī)體T細(xì)胞毒性以及NK細(xì)胞的活性，加強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫作用。IL-2屬細(xì)胞生長(zhǎng)因子類，能夠釋放腫瘤細(xì)胞因子，直接影響局部免疫狀態(tài)，通過誘導(dǎo)T細(xì)胞的大量增殖，增強(qiáng)其殺傷力，發(fā)揮抗病毒和腫瘤的重要作用。IL-4能夠促進(jìn)Th2細(xì)胞的產(chǎn)生，抑制Th1細(xì)胞功能，降低免疫細(xì)胞的應(yīng)答，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞因子的逃逸，可加速腫瘤進(jìn)展[13]。在本研究中，宮頸癌前病變合并HPV感染患者血清炎癥因子IFN-γ、IL-2水平明顯低于健康女性，IL-4水平明顯高于健康女性（P＜0.05）。 有臨床研究顯示[14]，宮頸癌以及癌前病變患者炎癥因子IFN-γ、IL-2水平顯著低于健康婦女，而IL-4水平顯著高于健康婦女，與本研究結(jié)論一致。

陰道微生態(tài)環(huán)境在疾病防御以及生殖繁衍等方面發(fā)揮著重要作用。健康狀態(tài)下，乳酸桿菌為陰道菌群中的優(yōu)勢(shì)菌，對(duì)于陰道正常菌群的維持發(fā)揮著重要作用，起著抵抗外部侵襲的屏障作用；弱酸性狀態(tài)能夠保持陰道環(huán)境穩(wěn)定，最大限度激活陰道免疫功能；H2O2作為乳酸桿菌的產(chǎn)物同樣能夠反映乳酸桿菌的狀態(tài)。當(dāng)陰道受到HPV感染，破壞陰道生態(tài)環(huán)境動(dòng)態(tài)平衡，陰道pH值以及菌群密集度、種類、清潔度等因素均會(huì)出現(xiàn)不同程度的異常，長(zhǎng)期的異常狀態(tài)使陰道更容易受微生物感染，增加引發(fā)宮頸癌前病變或?qū)m頸癌風(fēng)險(xiǎn)[15]。在本研究中，宮頸癌前病變合并HPV感染患者清潔度、菌群多樣性和菌群密集度的異常占比均明顯高于健康女性，宮頸癌前病變合并HPV感染患者pH值≤4.5和H2O2（+）的占比均明顯低于健康女性 （均P＜0.05）。有研究顯示，宮頸癌患者陰道微生態(tài)環(huán)境失衡，微生態(tài)環(huán)境功能降低，菌群多樣性Ⅰ/Ⅳ級(jí)、菌群密集度Ⅰ/Ⅳ級(jí)、pH值＞4.5的占比顯著高于健康婦女[16]，與本研究結(jié)論一致。

綜上，宮頸癌前病變合并HPV感染血IFN-γ、IL-2水平降低，IL-4水平上升，陰道微生態(tài)環(huán)境失調(diào)加劇，對(duì)于宮頸癌前病變合并HPV感染的診斷及治療有著十分重要的意義。