子宮內膜癌中PTEN與NDRG1的表達和臨床病理特征

賴世平，鄧再興，沈偉衛

（湖州市婦幼保健院，浙江 湖州 313000）

子宮內膜癌是婦科常見的惡性腫瘤，中國子宮內膜癌的發病率位列女性惡性腫瘤發病率的第3位（2009年），僅次于宮頸癌和甲狀腺癌[1]，嚴重影響著人類的健康和生活質量[2]。影響惡性腫瘤的基因分為抑癌基因和癌基因，PTEN （Phosphatase and Tensin Homologue Deleted on Chromosome 10）位于第10號染色體，是缺失的磷酸酶以及張力蛋白的同源基因，具有雙磷酸酯酶活性，可有效地抑制癌癥的發生，其缺失或突變與多種惡性腫瘤的發生有著密切的聯系[3]。NDRG是α/β水解酶超家族，NDRG1（含N-myc下游調節基因-1）是NDRG家族成員，具有磷酸泛酰巰基乙胺序列，在某些多酶復合物中，可提供輔酰基的載體蛋白，活化氨基酸及脂肪酸，在細胞生長分化及細胞周期中有重要作用[4]。本研究對蛋白PTEN和蛋白NDRG1在子宮內膜癌中的表達情況和臨床病理特征進行了分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年10月-2017年9月經手術切除并通過病理診斷為子宮內膜癌的患者150例為子宮內膜癌組，年齡30-65歲，平均（53.2±10.6）歲。入組患者均符合國際婦產聯盟標準（FIGO，2009 年）修訂的手術病理診斷[5]，其中Ⅰ-Ⅱ期118例，Ⅲ-Ⅳ期32例；根據2003年世界衛生組織的標準進行病理分級[6]，其中高分化64例、中分化55例，低分化31例。另取同期子宮內膜不典型增生[7]患者34例為不典型增生組，年齡27-65歲，平均（53.2±10.3）歲；子宮內膜正常者32例為正常內膜組，年齡 28-66 歲，平均（52.1±11.3）歲。 入組標本均來源于婦科活檢內膜組織，且臨床資料完整，未行手術治療或化療、放療等治療。

1.2 方法 鼠抗人PTEN單克隆抗體 （Clone 6 H2.1）購自DAKO公司。NDRG1單克隆抗體（小鼠抗人）購自Santa Cruz公司。從本院病理科挑選出符合要求的子宮內膜癌樣本，根據伊紅蘇木素染色進行組織形態學分析，標記代表性的病變部位并進行組織芯片制作，根據上海芯超生物有限公司組織芯片技術進行制作。兩種抗體均用EnVision兩步法進行染色。嚴格按照二抗試劑盒說明書進行實驗操作。采取抗體稀釋液代替一抗作為陰性對照組，確定非二抗背景顏色造成的陽性結果，選取已知陽性樣本作為陽性對照組，驗證選取的一抗具有正確的定位和染色結果。蛋白PTEN主要定位于細胞核內，子宮內膜組織中出現一個以上的腺體表達缺失時，即使出現周圍腺體呈PTEN陽性表達，也將其定義為PTEN陰性表達。蛋白NDRG1主要定位于細胞質中，根據子宮內膜腺上皮細胞內出現定位明確、染色具有深度定義為陽性表達。判讀標準[8]：（1）0分：陽性細胞比率≤5%；1分：陽性細胞比率＞5%～25%；2分：陽性細胞比率＞25%～50%；3分：陽性細胞比率＞50%～75%；4分： 陽性細胞比率＞75%；（2）染色強度：未著色被評為0分，淺黃色或淡棕黃色評為1分，棕黃色或深棕色評為2分，棕褐色或深褐色評為3分；將兩種判讀標準相乘，得分＜2分視為NDRG1陰性表達，得分≥2分視為NDRG1陽性表達。

1.3 觀察指標 （1）對比三組子宮內膜組織中PTEN及NDRG1的表達情況；（2）收集子宮內膜癌患者的臨床資料，分析PTEN和NDRG1表達與其臨床病理特征的關系；（3）檢測子宮內膜癌患者術前及術后6個月血清腫瘤標志物CP2，并記錄腹水發生情況，比較PTEN和NDRG1表達與CP2及腹水的關系。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0軟件進行數據分析，計數資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 PTEN、NDRG1陽性率比較 子宮內膜癌組PTEN蛋白陽性率均低于不典型增生組及正常內膜組，差異有統計學意義（均P＜0.05）；NDRG1蛋白在子宮內膜癌組中陽性率較其他兩組均升高，差異有統計學意義（均P＜0.05）。詳見表1。

表1 PTEN和NDRG1在不同子宮內膜組織中的表達（n）

2.2 PTEN和NDRG1的臨床病理特征 PTEN與NDRG1的陽性表達與子宮內膜癌的病理分級、TNM分期、肌層浸潤程度及是否存在淋巴結轉移有關，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。詳見表2。

2.3 PTEN和NDRG1與CP2、腹水的關系 在子宮內膜癌患者中，PTEN陰性者的CP2含量以及腹水發生率均高于陽性者，差異具有統計學意義（均P＜0.05）。NDRG1陽性患者的CP2含量以及腹水發生率均高于陰性者，差異均具有統計學意義（均P＜0.01）。 詳見表 3。

表2 PTEN和NDRG1表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系（n）

表3 PTEN和NDRG1表達與CP2、腹水的關系

3 討論

PTEN基因位于10q23.3染色體，全長200kb，是一種腫瘤的抑制基因。PTEN可有效調控磷脂酰肌及醇3激酶/蛋白激酶B信號傳導通路，從而起到抑制腫瘤增殖的作用。研究報道，子宮內膜癌的PTEN基因突變率或缺失率高達50%～83%，是所有惡性腫瘤中最高的[9]，PTEN基因的突變率或缺失率。有研究顯示，PTEN的表達與子宮內膜癌患者的臨床分期、肌層浸潤程度有關，與年齡及腫瘤大小無相關性[10]。本研究結果提示，PTEN基因在正常子宮內膜組織中陽性率顯著高于不典型增生及子宮內膜癌患者，子宮內膜不典型增生時，其陽性率明顯降低，在子宮內膜癌中的表達最低，且子宮內膜癌患者中，隨著腫瘤惡性程度的降低，PTEN的陽性率也相應降低。

NDRG1作為 α/β水解酶由 Belzen等[11]于1997年第一次報道，具有磷酸泛酰巰基乙胺序列，能夠活化氨基酸及脂肪酸，在細胞生長分化及細胞周期中起到重要作用[12]。NDRG1基因表達產生NDRG1調控蛋白，NDRG1蛋白作為促進細胞分裂及增殖的調控蛋白在人類的各種器官組織中廣泛表達，包括在上皮組織中，這與胚胎發育、細胞增殖、細胞分化均有著重要的聯系，不同的生理因素、病理病變都會刺激并誘導NDRG1基因的表達及陽性率上升。研究認為，NDRG1在肺癌、結腸癌、肝癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤中呈高表達，與惡性腫瘤長徑、TNM分期、細胞分化程度等具有相關性[13-14]。本文結果提示，NDRG1蛋白的表達在正常子宮內膜的陽性率，與不典型增生子宮內膜和子宮內膜癌相比較，其陽性率呈下降趨勢，隨著子宮內膜癌的分期提高，其表達陽性率也明顯提高。

CP2用于子宮內膜癌的診斷，其特異性及敏感性均超過CA125，其在正常組織中含量極少，但在惡性腫瘤中大量表達并釋放入血[15]。饒云霞[16]研究發現，子宮內膜癌患者血清中CP2的含量異常升高，且與癌細胞的增殖、侵襲密切相關。本研究通過研究CP2的水平以及腹水的情況與患者PTEN和NDRG1的表達發現，PTEN陰性者的CP2水平及腹水發生率顯著高于陽性者，NDRG1陽性者的CP2水平及腹水發生率顯著高于陰性患者。

綜上所述，通過免疫組織化學的方法檢測子宮內膜癌中PTEN和NDRG1的陽性率，可更準確地對其惡性程度及預后進行判斷。