纖支鏡毛刷常規(guī)脫落細胞學與液基細胞學在肺癌病理診斷中的應用對比

潘登，應靜，吳奇林，祝杭燕，周俊杰

（寧波市臨床病理診斷中心，浙江 寧波 315021）

肺癌早期診斷困難，確診時很多已是中晚期，無法進行手術，大大降低了患者的生存率。隨著病理技術的快速發(fā)展，纖維支氣管鏡微創(chuàng)且高效，已被廣泛運用于肺癌的早期診斷。傳統(tǒng)涂片制片后有殘余大量的血細胞粘液等雜質，造成閱片困難，嚴重影響病理診斷。最早運用于宮頸細胞學檢查的薄層液基制片技術能提高細胞樣本的檢查質量和癌變細胞的檢出率[1]，現(xiàn)已被廣泛運用于各類非婦科細胞學樣本的診斷中。本研究通過利用薄層液基制片技術處理纖支鏡毛刷樣本，對照相應活檢或大體組織學標本結果，并對比傳統(tǒng)涂片制片結果，探討其在肺癌病理診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月-2017年12月寧波市臨床病理診斷中心同時行常規(guī)脫落細胞涂片、液基細胞學檢查且具有常規(guī)組織學結果的纖支鏡毛刷標本1902例，其中男1420例，女482例，年齡（62.5±10.8）歲。

1.2 方法 （1）取樣。臨床醫(yī)生通過纖支鏡毛刷取樣，將毛刷直接放入裝有20mL PreservCyt保存液（美國豪洛捷公司產品）的保存瓶中，送檢至本中心處理制片。同時開展常規(guī)脫落細胞涂片，非婦液基細胞檢查的樣本由臨床醫(yī)生取樣后先直接涂片2張，再將毛刷放入裝有固定液的保存瓶中。涂片由95%酒精固定10-15分鐘后放入一次性玻片盒，隨后送至本中心進行HE染色。（2）纖支鏡毛刷液基細胞制片。在液基細胞室將保存瓶中的樣本倒入50mL離心管1500-2000轉離心5-10分鐘，棄上清液，加入30mL PreservCyt清洗液，放置于震蕩器上混勻5分鐘，再次1500-2000轉離心5-10分鐘，棄上清，將細胞轉移至Preserv Cyt保存瓶中加入新的保存液靜置15分鐘。直接將保存瓶放入新柏氏全自動細胞檢測儀Thinprep2000（美國豪洛捷公司產品）上制片并進行HE染色。（3）病理診斷。細胞學樣本先由初級細胞學診斷醫(yī)生進行初篩閱片，再由副主任醫(yī)師復片，疑難病例由多人討論會診并結合臨床情況給出細胞學病理報告。組織學標本由2人及以上組織學病理醫(yī)生閱片后給出病理報告。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 纖支鏡毛刷液基細胞學與常規(guī)脫落細胞學結果比較 將纖支鏡毛刷細胞學結果分為三類，陰性：診斷為涂片中未找到癌細胞；陽性：診斷為找到癌或癌疑細胞；其他：診斷為不能明確或找到非典型性細胞或異形細胞。組織學活檢病理結果也分為三類，陰性：良性病變，如炎癥，增生，息肉等；陽性：癌、其他惡性腫瘤、可疑癌；其他：不典型增生或異形。液基細胞學診斷的敏感度為52.78%（654/1239）、特異度為 89.80%（546/608）、 準確度為75.39%（1434/1902）；常規(guī)脫落細胞涂片法診斷的敏感度為 37.13%（460/1239）、特異度為 92.11%（560/608）、準確度為 63.62%（1210/1902）。 液基細胞學的敏感度 （χ2=25.34，P＜0.01） 和準確度 （χ2=11.21，P＜0.01）明顯優(yōu)于常規(guī)脫落細胞涂片，在特異性上差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.03，P=0.87）。詳見表1。液基細胞學和常規(guī)脫落細胞學對應組織學分型診斷結果詳見表2-3。

表1 纖支鏡毛刷液基細胞學與常規(guī)脫落細胞學結果比較（n）

2.2 纖支鏡毛刷液基細胞學與常規(guī)脫落細胞學分型診斷的準確性比較 以2015年WHO肺部腫瘤分類[2]為依據，結合實際組織學診斷結果對1902例標本進行分析，發(fā)現(xiàn)對腺癌的診斷，液基細胞學的敏感度高于脫落細胞學（P＜0.01），特異度低于脫落細胞學 （P＜0.01），準確度兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；對鱗癌的診斷，液基細胞學在敏感度、特異度和準確度上均高于脫落細胞學（均P＜0.01）；對非小細胞肺癌的診斷，液基細胞學特異度和準確度高于脫落細胞學（均P＜0.01），準確度兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；對小細胞肺癌的診斷，液基細胞學敏感度和準確度均高于脫落細胞學（P＜0.05和P＜0.01），特異度兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。詳見表4。

表2 液基細胞對應組織學分型診斷結果比較（n）

3 討論

利用纖支鏡毛刷取樣檢查作為肺癌早期診斷方法，具有操作簡便、創(chuàng)傷小、取材范圍大的特點，現(xiàn)已被廣泛的運用于臨床[3]。早期細胞學檢查運用傳統(tǒng)涂片法直接將樣本涂片固定后染色，由于受血液、粘液等雜質影響，常造成背景模糊，細胞重疊嚴重，細胞形態(tài)結構不清晰，有效細胞數量少，嚴重影響病理醫(yī)生閱片，容易出現(xiàn)漏診誤診[4-5]。且由于本身技術限制，涂片后毛刷直接被丟棄，大量殘留在毛刷上的樣本無法保留，無法進行進一步檢查。液基細胞學檢查，可以完整的保留幾乎所有樣本，通過前期樣本處理，可均勻的平鋪成直徑20mm圓形細胞層，細胞舒展，背景干凈，便于診斷。且剩余樣本可用于免疫組化和基因檢測，減少了患者再次取樣的麻煩。有研究表明液基細胞學檢查相比傳統(tǒng)涂片可明顯提高樣本的滿意度與檢出率[6]。但同樣由于樣本前期處理影響，液基細胞制片無法保留傳統(tǒng)涂片中近似組織結構的形態(tài)，給診斷造成一定的困難。

對本次統(tǒng)計的1902例樣本中，發(fā)現(xiàn)液基細胞學與常規(guī)脫落細胞學其特異度較高，而敏感度均相對偏低。可能原因為纖支鏡毛刷刷檢時未刷到病變樣本，或刷檢得到的病變細胞較少，且由于儀器統(tǒng)一取樣，制片時的細胞量僅為所有樣本的1/5，造成病理醫(yī)生在閱片時無法找到足量診斷為陽性的依據，出現(xiàn)陰性診斷，或僅能描述性的診斷為找到非典型性或異形細胞，這與國內外眾多研究基本一致[7-8]。當同時進行脫落細胞學與液基細胞學檢查時，其取樣時先將細胞涂于玻片上，再將剩余的毛刷樣本放入非婦液基細胞保存液中，也有可能造成液基制片時有效細胞量不足。

表3 常規(guī)脫落細胞學對應組織學分型診斷結果比較（n）

表4 液基細胞學與常規(guī)脫落細胞學對主要肺癌類型的診斷價值（%）

本組診斷的結果顯示，液基細胞學診斷的敏感度為52.78%、特異度為89.80%、準確度為75.39%；常規(guī)脫落細胞學診斷的敏感度為37.13%、特異度為92.11%、準確度為63.62%。液基細胞學在敏感度、特異度和準確度上均明顯優(yōu)于常規(guī)脫落細胞學。

肺癌的分型診斷對其后續(xù)治療具有重要作用[9]，發(fā)現(xiàn)對腺癌的診斷，液基細胞學的敏感度高于脫落細胞學 （P＜0.01），特異度低于脫落細胞學 （P＜0.01），準確度兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；對鱗癌的診斷，液基細胞學在敏感度、特異度和準確度上均高于脫落細胞學（均P＜0.01）；對非小細胞肺癌的診斷，液基細胞學特異度和準確度高于脫落細胞學 （均P＜0.01），準確度兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；對小細胞肺癌的診斷，液基細胞學敏感度和準確度均高于脫落細胞學 （P＜0.05和P＜0.01），特異度兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 總的來說，液基細胞學在診斷肺癌主要分型上優(yōu)于脫落細胞學。這與液基細胞學制片前期處理掉了樣本中的粘液、血細胞等雜質，使細胞更加清晰的平鋪于玻片上有關，解決了常規(guī)脫落細胞紅細胞過多、細胞重疊、背景雜質過多的問題。液基細胞學檢查在制片過程中無擠壓，細胞不易發(fā)生蛻變，細胞形態(tài)更加完整清晰，細胞核異型性明顯，可以清楚地觀察到核膜核仁特點，為最終診斷提供重要依據，且由于全自動制片染色，減少了人為因素造成的染色深淺等問題，使不同批次間的樣本能保持基本一致的染色效果，便于醫(yī)生的判讀。

綜上所述，液基細胞學技術解決了常規(guī)脫落細胞學背景雜亂，或由固定不及時等原因造成細胞核蛻變，最終造成診斷困難的問題，大大提高了肺癌檢查的敏感度和準確度，并為肺癌分型診斷提供了重要依據，但由于纖支鏡毛刷取樣無法取到等問題造成的漏診仍較難避免。建議采用液基細胞學技術處理纖支鏡毛刷樣本的同時，采用聯(lián)合脫落細胞學篩查的方法，以便取得較科學的結論。隨著液基細胞學標準化、規(guī)范化的操作技術不斷普及與發(fā)展，其必將在肺癌早期篩查診斷中體現(xiàn)重要價值。