葛根素對大鼠星形膠質細胞增殖、凋亡和β-catenin、cyclinD1、Bax蛋白表達的影響

田 龍，黃 月，丁 娜

1)鄭州人民醫院神經內科 鄭州 450003 2)河南省人民醫院神經內科 鄭州 450003

脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是一種嚴重的中樞神經系統(central nervous system，CNS)創傷性疾病，近年來發病率呈現明顯上升趨勢[1]。SCI后，阻礙軸突再生的主要因素是星型膠質細胞(astrocyte，AST)增殖活化、小膠質細胞活化及膠質瘢痕形成[2]。AST是CNS膠質細胞中體積最大的一種。有研究[3-4]顯示，H2O2、缺氧等多種因素均可抑制AST活力，誘導細胞凋亡，從而加重CNS損傷。因此，促進AST增殖及抑制其凋亡對于SCI治療具有重要意義。葛根素是從葛根中提取的一種異黃酮化合物，可抑制小膠質細胞活化，抑制腦缺血損傷后AST凋亡及抑制 tACPD誘導的AST腫脹和腦水腫,對CNS損傷具有保護作用[5-7]。本研究使用AST凋亡模型，探討葛根素對H2O2誘導的AST活力和凋亡的影響。

1 材料與方法

1.1動物、試劑和儀器新生1～3 d的SPF級SD大鼠2只，體重3～5 g，由鄭州大學實驗動物中心提供；葛根素購自中國藥品生物制品檢定所；β-catenin、cyclinD1和Bax抗體均購自美國Abcam公司；MTT、DMSO均購自美國Sigma公司；細胞凋亡試劑盒、流式細胞儀均購自美國BD公司；酶標儀購自美國BioTek公司。

1.2大鼠脊髓AST的分離、培養無菌條件下取出2只SD大鼠的脊髓組織，置于盛有預冷PBS緩沖液的培養皿內，剝離血管及脊膜，PBS緩沖液沖洗、剪碎、離心，沉淀用2.5 g/L胰蛋白酶消化后棄上清，加含體積分數15%胎牛血清的DMEM培養基，混勻重懸后過200目篩網，以107～109個/L濃度轉移至含DMEM培養基的75 cm2培養瓶中，于體積分數5% CO2、37 ℃恒溫培養箱孵育1 h(差速貼壁，去除成纖維細胞)。翻轉培養瓶，將尚未貼壁的細胞懸液取出，以1.0×106個/mL濃度接種于培養皿，于培養箱內繼續培養，每2～3 d換液1次。……