結直腸癌患者血清miR-106b-5p水平及臨床意義

邱 敏,李森娟,凌怡庭,沈桂鑫,曹鴻峰

(1.浙江省嘉興市第二醫院肛腸科 314000;2.浙江省人民醫院肛腸外科，杭州 310013)

結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，發病率和病死率居高不下，早期結直腸癌大多沒有明顯臨床癥狀，多數患者發現時已為晚期，術后5年生存率較低[1]。結直腸癌的早期診斷缺少靈敏度和特異度較高的指標[2]。miR-106b是miR-106b-25家族成員，在腎癌、食管癌等多種惡性腫瘤中高表達，具有調控腫瘤細胞生長、轉化、侵襲、遷移等功能[3-4]，但其在結直腸癌中的意義尚不十分清楚。本文對結直腸癌患者血清miR-106b-5p水平及其意義進行研究，為臨床提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇浙江省嘉興市第二醫院肛腸科2015年1月至2017年12月收治的60例結直腸癌患者作為結直腸癌組，同期60例健康體檢者作為對照組。60例結直腸癌患者均進行手術治療，手術前后均進行miR-106b-5p水平測定。納入標準：結直腸癌患者均為行首次手術治療，術前未進行放化療等其他治療的初診患者，均經病理學明確診斷為結直腸癌；對照組身體健康，無惡性腫瘤病史。排除標準：糖尿病、高血壓、肝腎疾病、心腦血管疾病等慢性疾病史者，嚴重煙酒嗜好者。結直腸癌組結腸癌24例，直腸癌36例；腫瘤位于左半結直腸45例，右半結直腸15例；患者年齡(59.32±4.35)歲；男42例，女18例；腫瘤直徑小于或等于5 cm者26例，腫瘤直徑大于5 cm者34例；臨床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期21例，Ⅲ期25例，Ⅳ期2例；高分化25例，中分化21例，低分化14例；淋巴結轉移22例；遠處轉移5例；浸潤深度：T1 12例，T2 14例，T3 16例，T4 18例。對照組患者年齡(59.45±4.16)歲；男38例，女22例，結直腸癌組和對照組年齡、性別比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2主要試劑 引物由上海歐易生物醫學科技有限公司設計合成，實時熒光聚合酶鏈反應(PCR)儀器及相關試劑盒購自美國Thermo Fisher公司。

1.3方法 收集患者性別、年齡、臨床病理特點及血清癌胚抗原(CEA)水平等臨床資料。對照組患者體檢當日清晨抽取外周靜脈血4 mL，結直腸癌患者抽取術前及術后1周外周靜脈血4 mL，3 000 r/min離心10 min，取上清液，提取血清中總RNA，采用反轉錄試劑盒將RNA反轉錄合成cDNA，反轉錄反應條件為37 ℃ 60 min，95 ℃ 5 min，以cDNA為模板，采用熒光定量PCR法測定血清miR-106b-5p水平，miR-106b-5p引物序列為5′-AAA GUG CUG ACA GUG CAG-3′。反應條件為95 ℃ 3 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，共50個循環，選U6為內參基因，U6 snRNA引物序列為5′-TTC GTG AAG CGT TCC ATA TTT T-3′。血清miR-106b-5p相對表達量以2-ΔΔCt表示。

2 結 果

2.1血清miR-106b-5p和CEA水平比較 結腸癌組和直腸癌組血清miR-106b-5p、CEA水平高于對照組(P<0.05)，結腸癌組和直腸癌組血清miR-106b-5p、CEA水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組患者血清miR-106b-5p和CEA水平比較

a:P<0.05，與結腸癌組比較;b:P<0.05,與直腸癌組比較

2.2結腸癌組和直腸癌組患者手術前后血清miR-106b-5p和CEA水平比較 結腸癌組和直腸癌組患者手術后血清miR-106b-5p和CEA水平均低于手術前(P<0.05)。結腸癌組和直腸癌組之間手術前后血清miR-106b-5p和CEA水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3血清miR-106b-5p診斷結直腸癌的ROC曲線分析 血清miR-106b-5p診斷結直腸癌的ROC曲線下面積為0.845(95%CI：0.771～0.954；P<0.01)，血清miR-106b-5p對結直腸癌的最佳診斷閾值為2.08，敏感度為83.7%，特異度為82.1%，見圖1。

2.4血清miR-106b-5p水平與結直腸癌臨床病理特點的關系 血清miR-106b-5p水平與結直腸癌臨床分期、淋巴結轉移、遠處轉移有關(P<0.05)，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移、遠處轉移者血清miR-106b-5p水平高；血清miR-106b-5p水平與結直腸癌患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度、位置無顯著相關性(P>0.05)，見表3。

表2 結腸癌組和直腸癌組患者手術前后血清miR-106b-5p和CEA水平比較

圖1 血清miR-106b-5p診斷結直腸癌的ROC曲線

表3 血清miR-106b-5p水平與結直腸癌臨床病理特點的關系

項目nmiR-106b-5p相對表達量tP年齡(歲)1.0070.318 ≤60393.53±0.51 >60213.68±0.62性別0.4160.679 男423.66±0.62 女183.59±0.54腫瘤直徑(cm)0.8620.392 ≤5263.57±0.64 >5343.71±0.61臨床分期6.274<0.01 Ⅰ～Ⅱ333.12±0.56 Ⅲ～Ⅳ274.19±0.76分化程度0.7620.449 高253.55±0.69 中、低353.69±0.71淋巴結轉移9.466<0.01 是224.41±0.74 否382.92±0.48遠處轉移8.304<0.01 是54.58±0.61 否552.82±0.44浸潤深度1.0160.314

續表3 血清miR-106b-5p水平與結直腸癌臨床病理特點的關系

3 討 論

隨著生活水平的提高，結直腸癌的發病率有上升趨勢，盡管結直腸癌的手術技術不斷提高、治療方法不斷進步，仍有不少結直腸癌患者轉移和復發，嚴重影響患者預后，因此尋找結直腸癌有效的早期診斷指標具有重要意義[5]。血清癌胚抗原水平是最早發現的結直腸癌患者的血清標志物，但癌胚抗原特異性比較低，在多數惡性腫瘤中具有不同程度升高，對結直腸癌的診斷價值不大，因此尋找敏感度和特異度比較高的結直腸癌診斷標志物是提高結直腸癌早期診斷水平的重要手段之一[6-7]。近年來，隨著對miRNA研究的深入，發現循環血中miRNA在結直腸癌的早期診斷及預后評估等方面具有重要作用[8-9]。

miR-106b位于人類7q22染色體上，可與靶mRNA的3′非翻譯區結合，通過抑制mRNA翻譯或誘導mRNA降解調節基因表達[10-11]；miR-106b在多種腫瘤中表達水平升高，和惡性腫瘤的細胞生存、腫瘤生長、新生血管生成等關系密切[12-14]，如劉俊麗等[15]研究發現鼻咽癌組織中miR-106b水平高表達，與鼻咽癌病灶內細胞周期和侵襲關系密切；肖長艷等[16]研究發現miR-106b在食管鱗癌中呈高表達，與食管鱗癌的淋巴結轉移和不良預后關系密切，可作為食管鱗癌診斷和預后的標志物；邵琳等[17]研究發現miR-106b在卵巢漿液性癌組織中高表達，miR-106b在卵巢漿液性癌的發生發展中具有重要作用，可促進卵巢癌細胞的增殖和侵襲。上述研究表明miR-106b在多種惡性腫瘤中高表達。miR-106b可通過與其靶基因結合調控細胞的增殖、分化及凋亡等過程，如桂連等[18]研究發現miR-106b可通過調控胰島素分泌細胞(IPCs)誘導分化過程中Ngn3的表達；史文博等[19]研究發現miR-106b可通過靶向調節BTG3的表達調控非小細胞肺癌細胞的增殖和凋亡。結直腸癌為常見的消化道惡性腫瘤，miR-106b與結直腸癌的關系如何尚不十分清楚，本文對結直腸癌患者血清miR-106b-5p水平進行研究，發現結直腸癌患者血清miR-106b-5p水平升高，結直腸癌患者治療后血清miR-106b-5p水平下降；血清miR-106b-5p診斷結直腸癌的ROC曲線下面積為0.845，敏感度為83.7%，特異度為82.1%；血清miR-106b-5p水平與結直腸癌的臨床分期和轉移關系密切。miR-106b-5p水平與結直腸癌的臨床分期和轉移關系密切，考慮可能為miR-106b-5p與其相關的靶基因結合調控結直腸癌細胞的增殖、凋亡、侵襲，從而在結直腸癌的臨床分期和轉移中發揮重要作用。至于miR-106b-5p通過與哪種靶基因結合調控結直腸癌細胞生長和侵襲，以及通過哪種途徑參與結直腸癌細胞的生長和侵襲過程尚需今后在體內外細胞實驗中深入研究。

綜上所述，miR-106b-5p參與結直腸癌的發生發展，miR-106b-5p有望成為結直腸癌早期診斷的標志物。