CMIA法檢測老年人群梅毒螺旋體抗體的假陽性分析

王雨涵，黃遠帥

(西南醫科大學附屬醫院輸血科，四川瀘州 646000)

梅毒(syphilis)是由蒼白密螺旋體(treponema pallidum，TP)引起的慢性全身性傳染病[1-2]，主要由性接觸傳播，也可通過輸血或母嬰垂直傳播[3]。近年來梅毒發病率升高較快，已成為較嚴重的公共衛生問題[4]。TP病毒感染早期診斷和發現，對預防傳播和控制流行至關重要[5]。目前，梅毒檢測已成為臨床患者、獻血人員和體檢人群的常規篩查項目。面對標本量的急增，臨床實驗室需要有高靈敏度和特異性的梅毒測定方法，同時又需要操作簡便和自動化程度高。化學發光法因其靈敏度高，特異性好，已經成為國外TP檢測的主要方法，而國內化學發光TP檢測還處在初期階段[6]。化學發光微粒子免疫分析法(chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA)是一種新型免疫學檢測技術，檢測樣本發光信號S/CO值明顯高于ELISA方法，對于抗體效價低弱陽性標本，有明顯的優勢，利于早期發現感染[7]。但高敏感性的檢測方法可能受到其他因素影響，導致假陽性增高，而老年人群基礎疾病多，身體狀況差，免疫功能紊亂，更易影響CMIA的檢查結果，造成假陽性率增高，因此本研究旨在研究CMIA在老年人群TP抗體檢測中的假陽性情況，并分析原因，提出相應處理措施。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2017年11月至2018年12月西南醫科大學附屬醫院門診及住院部108 345份需要進行TP篩查的患者血清為研究對象。根據年齡將研究對象分為觀察組（年齡≥60歲）和對照組（年齡18～59歲）。其中觀察組40 229例，對照組68 116例。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器

鄭州安圖生物科技有限公司Autolumo PLUS全自動化學發光測定儀。

1.2.2 試劑

鄭州安圖生物科技有限公司人類免疫缺陷病毒抗體檢測試劑盒（CMIA法）；英國OMEGA公司梅毒螺旋體血球凝集試驗試劑盒（TPHA法）。

1.3 方法

采用化學發光微粒子免疫分析法（鄭州安圖公司）對108 345份患者血清進行檢測，陽性結果采用TPHA方法進行確診。所有檢測過程均按照標準化操作程序完成。

1.4 結果判定標準

CMIA法結果判定標準：待測樣本發光值＜Cutoff值時，檢測呈陰性反應；待測樣本發光值≥Cutoff值時，檢測呈陽性反應。Cutoff值=陽性對照孔平均發光值×0.2，儀器操作時，自動計算并保存每批試劑的Cutoff值。本實驗中Cutoff值=1.0。有效性判斷：陽性對照孔平均發光值/陰性性對照孔平均發光值應大于10，否則應重新試驗。

TPHA法結果判讀標準：陽性對照：在血凝板底部形成不規則凝集塊；陰性對照：在孔底形成致密、規則的圓形細胞沉淀。目測：凡出現細胞凝集者為陽性反應，不出現凝集者為陰性反應：-/不凝集：細胞沉積在板孔中央呈邊緣光滑的紐扣狀；+/凝集：細胞形成多邊形或不規則環狀沉積；2+～4+/強凝集：細胞形成邊緣粗糙不規則形狀或薄膜狀覆蓋到板孔底。加入對照血清細胞的反應孔不應出現凝集，如果出現凝集，說明存在抗血細胞抗體，應重復試驗。重復試驗時，應先用對照細胞懸液將標本按1∶4稀釋，在室溫靜置45～60 min，再經1 000 r/min離心5 min，取上清液按1∶5稀釋，再進行試驗，如果加入試驗細胞懸液仍出現凝集，可判為陽性結果。

假陽性判斷：化學發光微粒子免疫分析法陽性而TPHA試驗陰性。真陽性判斷：磁微粒發光化學法與TPHA試驗均為陽性。

1.5 統計學方法

采用SPSS 20.0軟件，率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

納入研究的108 345例患者血清標本采用化學發光微粒子免疫分析法共篩查出陽性樣本4 442例，陽性率為4.10%。陽性結果全部采用TPHA方法進行確診，確診陽性率為93.86%。初篩陽性率觀察組高于對照組（P＜0.05)。假陽性率觀察組高于對照組（P ＜0.05)，男性高于女性（P ＜0.05)，見表1、表2。

表1 化學發光微粒子免疫分析法檢測TP抗體的性能分析

3 討論

由于人們對性傳播疾病知識了解及防護程度不足，梅毒感染已由高危人群轉向普通人群，隱性感染者大量增加。梅毒的臨床癥狀表現多樣，且隱性梅毒患者較多，傳播速度快，社會危害大，且能經母嬰傳播，給胎兒帶來重大危害[8-9]。臨床工作中應推薦使用敏感性和特異性高的試劑用于篩查，有效降梅毒傳播的風險。化學發光微粒子免疫分析法是將磁性分離技術、化學發光技術、免疫分析技術三者結合起來的一種新興分析方法。該技術充分利用了磁性分離技術的快速易自動化，化學發光技術的高敏感性，以及免疫分析的特異性，在梅毒抗體檢測領域展現了不可替代的作用[10-11]。但據文獻報道CMIA法檢測TP抗體高敏感性的同時伴隨著假陽性率增高，尤其是在老年人群中[12]。

本研究中采用CMIA法對最近1年本院就醫患者進行TP抗體篩查，發現TP初篩陽性率為4.10%，與張旭東等[6]的4.52%相近，高于秦宏、龐麗平、靳秀英等[13-15]的報道，流行情況仍較為嚴峻。一方面是本院所在地區位于川、滇、黔、渝結合部，人口流動大、勞務輸出和靜脈吸毒人員均比較多，使得TP的陽性率較高[16]。另一方面，所在地經濟發展水平相對落后，在梅毒檢測、預防、治療以及宣傳等方面的經費投入不足，公眾對梅毒的危害以及自我保護知識了解甚少。

在本研究中采用CMIA法檢測陽性結果中與TPHA結果比較假陽性率為6.15%，與國內學者報道結果[2]接近。在CMIA法梅毒血清學試驗陽性的老年人中，較大一部分無任何臨床癥狀及體征、無疾病相關流行史、無高危行為、無TP病毒感染史，其假陽性的可能性大。本研究中，老年患者（年齡≥60歲）經CMIA法檢測出的陽性率為8.14%，而經TPHA檢測出的假陽性率為0.76%，經比較老年組出現的低值陽性率和假陽性率均明顯升高，差距有統計學意義（P＜0.05)，與何江才的報告類似[17]。這部分人假陽性的原因可能是：①老年人身體功能減退，常合并一些基礎疾病，如心血管病、糖尿病等，這些疾病可使機體釋放誘導產生抗類脂抗體（或）抗TP抗體的交叉抗原；②老年患者伴有類風濕關節炎、接受免疫抑制劑治療的患者比例相對更高，更容易產生一些自身抗體、異嗜性抗體、異常蛋白等交叉反應物質[18]，干擾化學發光反應出現假陽性。因此，老年人CMIA法檢測TP抗體結果呈現低值陽性時，一定要結合病史、臨床表現和其他檢驗結果等綜合考慮[19]。盡量避免梅毒化驗結果假陽性造成的誤診，這對于避免醫患糾紛是十分必要的[20]。值得注意的是本研究所采取的TP確診方法是TPHA法，具有一定的局限性。據報道，如果用TPHA法確證TP-CMIA法的假陽性，會有真陽性誤判為假陽性，可采用靈敏度、特異性均較高的TP-Western Blot作為確診試驗[21]。

CMIA技術檢測TP抗體具有靈敏性高、特異度高、重復性好、線性范圍寬等優點。但同時存在假陽性率較高，特別是老年人群更要慎重對待。可從以下幾個方面采取措施，提高診斷的準確性：①首先，對老年人群陽性結果尤其是低值陽性檢測結果應采取多種方法進行復檢及確診，或定期隨訪觀察；②與臨床醫生溝通，結合患者的疾病診斷、癥狀體征、病史、其他實驗室檢查、治療反應及流行病學等信息綜合考慮；③患者處于其它感染活動期，體內可能存在抗體干擾，建議間隔一段時間復查；④對不合格的樣本拒收，做好樣本檢測前處理工作；⑤必要時結合TP免疫印跡試驗或梅毒螺旋體檢測和定期復檢，以最大限度預防TP的傳播。

4 結 論

CMIA技術具有很高的靈敏度，良好的特異性和線性范圍，但老年人群基礎疾病多，身體狀況差，免疫功能紊亂，更易影響CMIA的檢查結果，造成假陽性率增高，對此類結果應慎重處理，做好復檢及確診試驗工作，并結合臨床實際情況綜合判斷，以防漏診或誤診。