乳腺癌術后胸壁復發患者腫瘤組織CXCR4、Survivin表達變化及其意義

艾秀清，曹茜，韓有溪，王義海

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院，烏魯木齊830011)

近年來，乳腺癌發病率不斷升高且呈年輕化趨勢，嚴重威脅女性生命健康和生活質量[1]。隨著臨床診療技術的快速發展，雖然乳腺癌術后放化療、內分泌或靶向治療已能明顯改善患者預后，但術后復發和轉移仍十分常見[2]。局部復發通常是乳腺癌治療失敗的第一征象，多出現在初次治療2年以內[3]，其中胸壁復發占50%～94%，患者預后較差[4，5]。因此，探索與乳腺癌術后胸壁復發相關的分子，對指導治療方案和評價患者預后尤為重要。趨化因子受體4(CXCR4)屬于G蛋白偶聯受體超家族成員，可誘導促炎細胞因子形成，能在胚胎形成階段調控多種細胞的遷移[6]。有研究表明，CXCR4表達變化與乳腺癌的復發和轉移密切相關[7]。生存素(Survivin)是新近發現的凋亡抑制基因，具有抑制細胞凋亡和調節細胞分裂的功能[8]。有研究報道，乳腺癌組織Survivin高表達，其表達變化與患者預后有關[9，10]。本研究觀察了乳腺癌術后胸壁復發患者原發腫瘤組織、復發腫瘤組織CXCR4、Survivin表達變化，并分析其表達變化與患者臨床病理特征和預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2006年2月～2011年2月新疆醫科大學附屬腫瘤醫院收治的乳腺癌術后胸壁復發患者120例。納入標準：①曾行乳腺癌根治術，術后病理證實為乳腺浸潤性導管癌；②手術瘢痕區或其鄰近胸壁皮膚或皮下出現結節，經活檢病理檢查證實為胸壁復發；③根治性手術前未行任何抗腫瘤治療；④女性，漢族，年齡25～70歲；⑤臨床病理資料完整。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤或重要臟器嚴重疾病者；②乳腺癌根治術前已出現遠處轉移者；③年齡>70歲，不能耐受放療、化療或靶向治療者；④臨床資料不完整者。患者年齡(47.9±3.0)歲；絕經31例，未絕經89例；復發前手術方式：乳腺癌根治術16例，乳腺癌改良根治術104例；復發前腫瘤直徑：≤2 cm 29例，>2～5 cm 69例，>5 cm 22例；復發前臨床分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期48例，Ⅲ期55例；復發前轉移淋巴結個數：0個39例，1～3個46例，4～9個18例,≥10個17例；復發前放療65例，未放療55例。本研究經新疆醫科大學附屬腫瘤醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 CXCR4、Survivin表達檢測 取患者復發腫瘤組織、原發腫瘤組織及其癌旁正常組織標本，10%甲醛固定24 h，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，5 μm厚連續切片。將切片置于60 ℃烤箱烘烤1 h，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，3% H2O2室溫孵育以阻斷內源性過氧化物酶，枸櫞酸鈉緩沖液(pH 6.0)微波爐加熱抗原修復，自然冷卻至室溫。分別加入兔抗人CXCR4單克隆抗體(1∶100)、兔抗人Survivin單克隆抗體(1∶100)，4 ℃孵育過夜。次日，加入辣根過氧化物酶標記的鼠抗兔二抗(1∶100)，37 ℃孵育30 min。DAB顯色，自來水終止顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照。

采用雙盲法由2位病理科醫師獨立閱片。CXCR4、Survivin陽性染色定位于細胞核或細胞質，呈棕黃色顆粒。每張切片隨機選取5個400倍視野，每視野計數不少于100個細胞，計算陽性細胞比例，并評估染色強度。染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞比例評分：無陽性細胞為0分，陽性細胞比例≤20%為1分，陽性細胞比例>20%～50%為2分，陽性細胞比例>50%～80%為3分，陽性細胞比例>80%為4分。以染色強度評分和陽性細胞比例評分綜合評價陽性表達，二者乘積≥5為陽性表達。

1.3 隨訪 所有患者自確診乳腺癌胸壁復發開始，采用電話或門診方式隨訪，隨訪截至2016年7月，統計患者生存時間和1、2、5年生存率。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組織CXCR4、Survivin表達比較 見表1。

表1 各組織CXCR4、Survivin陽性表達比較[例(%)]

注：與癌旁正常組織比較，*P<0.05。

2.2 復發腫瘤組織CXCR4、Survivin表達與患者臨床病理特征的關系 復發腫瘤組織CXCR4陽性表達與患者復發前腫瘤直徑、TNM分期、轉移淋巴結個數有關(P均<0.05)，與患者年齡、月經狀態、復發前手術方式和復發前是否放療無關(P均>0.05)。復發腫瘤組織Survivin陽性表達與患者復發前腫瘤直徑、TNM分期、轉移淋巴結個數、是否放療有關(P均<0.05)，與患者年齡、月經狀態、復發前手術方式無關(P均>0.05)。見表2。

表2 復發腫瘤組織CXCR4、Survivin表達與患者臨床病理特征的關系

2.3 復發腫瘤組織CXCR4、Survivin表達與患者預后的關系 至2016年7月，乳腺癌術后胸壁復發患者共隨訪5～110個月。復發腫瘤組織CXCR4陽性表達者與陰性表達者中位生存時間分別為40.6、72.4個月；復發腫瘤組織Survivin陽性表達者與陰性表達者中位生存時間分別為50.3、83.1個月。復發腫瘤組織CXCR4、Survivin陽性表達者中位生存時間均明顯低于其陰性表達者(P均<0.05)。復發腫瘤組織CXCR4陽性表達者1、2、5年生存率分別為95.52%、52.33%、23.88%，陰性表達者分別為100%、94.33%、79.24%；復發腫瘤組織Survivin陽性表達者1、2、5年生存率分別為95.31%、64.06%、28.12%，陰性表達者分別為100%、78.57%、71.42%。復發腫瘤組織CXCR4、Survivin陽性表達者1、2、5年生存率均明顯低于其陰性表達者(P均<0.05)。

3 討論

乳腺癌是女性發病率最高的惡性腫瘤，盡管近年來其早期診斷和治療水平不斷提升，但治療后復發和轉移仍十分常見[11]。有研究報道，乳腺癌術后局部復發率為10%～40%，以胸壁復發最為常見，且胸壁復發可發生于術后任何時段[12]。因此，探索與乳腺癌胸壁復發相關的分子，對明確乳腺癌發生、發展的分子生物學機制具有重要意義[13]。

CXCR4是一種G蛋白偶聯受體，廣泛表達于各類淋巴細胞、內皮細胞和神經元細胞等。CXCR4通過與CXCL12結合，激活細胞內一系列信號轉導通路及效應分子，從而誘發腫瘤細胞增殖、侵襲、遷移和血管生成，在腫瘤的發生、發展過程中具有重要作用[14]。有研究表明，CXCR4表達變化與原發性乳腺癌患者遠處轉移密切相關[15]。Survivin是凋亡抑制蛋白家族成員[16]，在人類多種惡性腫瘤組織中高表達，而在相應正常組織和細胞中無表達或低表達，這表明Survivin表達與多種惡性腫瘤的發生、發展有關[17]。有研究發現，Survivin可通過抑制腫瘤細胞凋亡，促進乳腺癌的發生、發展，且其表達可作為患者預后的預測指標[18]。

本研究結果發現，乳腺癌術后胸壁復發患者復發腫瘤組織和原發腫瘤組織CXCR4、Survivin陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織，說明CXCR4、Survivin表達變化與乳腺癌的發生、發展有關。在乳腺癌術后胸壁復發患者中，CXCR4、Survivin表達并不是一成不變的，部分患者在原發腫瘤組織中陰性表達，而在復發腫瘤組織中陽性表達，復發腫瘤組織CXCR4、Survivin陽性表達率雖高于原發腫瘤組織，但差異無統計學意義，這可能與本研究樣本量較少有關。因此，我們認為CXCR4、Survivin表達變化可能與乳腺癌術后復發有關。復發腫瘤組織CXCR4陽性表達與患者復發前腫瘤直徑、TNM分期、轉移淋巴結個數有關，與患者年齡、月經狀態、復發前手術方式和復發前是否放療無關；復發腫瘤組織Survivin陽性表達與患者復發前腫瘤直徑、TNM分期、轉移淋巴結個數、是否放療有關，與患者年齡、月經狀態、復發前手術方式無關。提示CXCR4、Survivin表達可能與乳腺癌術后復發和轉移有關。本研究結果還發現，復發腫瘤組織CXCR4、Survivin陽性表達者中位生存時間和1、2、5年生存率均明顯低于其陰性表達者，提示CXCR4、Survivin表達可能與乳腺癌術后復發患者預后有關，有可能成為預測乳腺癌術后復發患者預后的指標。

綜上所述，乳腺癌術后胸壁復發患者原發和復發腫瘤組織CXCR4、Survivin表達均明顯升高，其表達變化與腫瘤復發和轉移有關。二者有可能成為預測乳腺癌術后復發患者預后的指標。