非小細胞肺癌組織ZNF217蛋白表達變化及其與患者臨床病理特征和預后的關系

常世川，朱川，任必勇，黃小平，鄧超，劉良忠

(重慶三峽中心醫院，重慶404000)

非小細胞肺癌(NSCLC)是肺癌中最常見的類型，約占肺癌總數的85%[1]，其早期確診率不高，大部分患者確診時已進展為局部晚期或晚期，錯過了最佳手術時機，預后較差。隨著分子生物學的不斷發展，NSCLC被細分為不同的分子亞型，并由此研發了各類分子靶向藥物。分子靶向藥物的應用能夠明顯改善NSCLC患者預后，但大部分患者用藥6～12個月出現獲得性耐藥[2]。因此，尋找NSCLC新的治療靶點具有重要意義。人類20號染色體，特別是20q13區域基因擴增與乳腺癌、卵巢癌、胃癌等腫瘤發生、發展密切相關[3～6]。1998年，Collins等[7]在人染色體20q13區域發現了一個含260 kb的基因，命名為鋅指基因217(ZNF217)，其表達產物為ZNF217蛋白。但目前ZNF217蛋白與NSCLC的關系尚不明確。本研究觀察了NSCLC組織ZNF217蛋白表達變化，并分析其表達變化與患者臨床病理特征和預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年1月～2012年1月重慶三峽中心醫院收治的NSCLC患者85例。所有患者經術后組織病理檢查明確診斷。納入標準：①符合NSCLC診斷，初診；②年齡>18歲；③TNM分期(IASLC第七版)Ⅰ～Ⅲ期；④均行肺癌根治術，術前未行任何抗腫瘤治療；⑤ECOG評分0～2分；⑥臨床病理資料完整。排除標準：①非NSCLC者；②術前已發生遠處轉移者；③術前接受其他抗腫瘤治療者；④術后殘留病灶者；⑤合并其他腫瘤或心、腦、腎等重要器官嚴重疾病者；⑥臨床病理資料不完整者。其中，男59例，女26例；年齡≤60歲51例，>60歲34例；有吸煙史53例，無吸煙史32例；ECOG評分：0分46例，1分33例，2分6例；病理類型：腺癌35例，鱗癌43例，其他7例；T分期：T1期37例，T2期37例，T3期11例；N分期：N0期36例，N1期44例，N2期5例；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期57例，Ⅲ期8例；手術方式：肺葉切除80例，單側全肺切除5例。本研究經重慶三峽中心醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 ZNF217蛋白表達檢測 采用免疫組化法。取手術切除的NSCLC組織及其配對的癌旁正常組織(距腫瘤組織邊緣>3 cm)，10%中性甲醛固定，常規脫水、透明，石蠟包埋，4 μm厚連續切片。將切片置于80 ℃烤箱30 min，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，3%過氧化氫室溫避光孵育10 min，0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖液加熱抗原修復，自然冷卻至室溫。10%正常山羊血清封閉30 min，然后加入兔抗人ZNF217抗體(稀釋比1∶800)，4 ℃孵育過夜。次日加入生物素標記的山羊抗兔IgG二抗，37 ℃孵育30 min。DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知ZNF217蛋白陽性切片作為陽性對照。所有操作嚴格按Envision試劑盒說明進行。

由兩位病理科醫師采用雙盲法獨立閱片。ZNF217蛋白陽性染色定位于細胞核，呈淡黃色至棕褐色顆粒。每張切片隨機至少選取5個400倍視野，評價染色強度，計數陽性細胞，計算陽性細胞比例。以染色強度評分和陽性細胞比例評分綜合判定ZNF217蛋白陽性表達。染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞比例評分：<10%為0分，10%～<25%為1分，25%～<50%為2分，≥50%為3分。兩項評分乘積≥1為ZNF217蛋白陽性表達。

1.3 隨訪 所有患者術后定期隨訪，隨訪方式包括電話、門診、信件等，隨訪截至2017年1月。統計患者總生存期(OS)。OS是指患者首次診療至因任何原因引起死亡的時間(失訪患者為最后一次隨訪時間，研究結束仍然存活患者為隨訪截至日期)。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NSCLC組織與癌旁正常組織ZNF217蛋白表達比較 NSCLC組織與癌旁正常組織ZNF217蛋白陽性表達率分別為55.3%(47/85)、25.9%(22/85)。NSCLC組織ZNF217蛋白陽性表達率明顯高于癌旁正常組織(χ2=23.999，P<0.01)。

2.2 NSCLC組織ZNF217蛋白表達與患者臨床病理特征的關系 NSCLC組織ZNF217蛋白表達與腫瘤T分期、N分期和TNM分期有關(P均<0.05)，與性別、年齡、吸煙史、ECOG評分、病理類型、手術方式無關(P均>0.05)。見表1。

2.3 ZNF217蛋白表達與NSCLC患者預后的關系 所有患者術后隨訪截至2017年1月，隨訪6～78個月、中位隨訪時間50.6個月。ZNF217蛋白陽性表達者中位OS為39個月，ZNF217蛋白陰性表達者為61個月。ZNF217蛋白陽性表達者中位OS明顯低于ZNF217蛋白陰性表達者(χ2=7.770，P<0.01)。見圖1。

3 討論

NSCLC是現階段全球范圍內腫瘤相關死亡的主要原因之一。隨著分子生物學的不斷發展，NSCLC系列致癌驅動基因相繼確定，肺癌分型也由過去單純的組織病理學分類，進一步細分為基于驅動基因的分子亞型[8]，并由此研發了各類分子靶向藥物。分子靶向藥物的臨床使用明顯改善了攜帶相應驅動基因的NSCLC患者預后。但大部分患者用藥一段時間后易出現獲得性耐藥。因此，需要不斷尋找NSCLC新的致癌驅動基因。

表1 NSCLC組織ZNF217蛋白表達與患者臨床病理特征的關系(例)

圖1 不同ZNF217蛋白表達者生存曲線

ZNF217定位于人染色體20q13.2，是新發現的候選癌基因。有研究證實，ZNF217與乳腺癌、胃癌、結直腸癌等腫瘤的發生、發展有關[9]。ZNF217編碼產物為ZNF217蛋白，屬于鋅指蛋白家族成員。研究表明，鋅指蛋白家族成員在多種腫瘤的發生、發展過程中具有重要作用。但目前ZNF217蛋白與NSCLC的關系尚不明確。

季婷婷等[10]研究發現，胰腺癌組織ZNF217蛋白表達明顯高于癌旁正常組織，且其高表達與腫瘤體積、TNM分期、神經浸潤、淋巴結轉移有關。有研究認為，ZNF217可能在mRNA轉錄層面上抑制E-cadherin表達，從而促進細胞上皮-間質轉化(EMT)，最終導致腫瘤的發生、發展[11，12]。Luo等[13]通過慢病毒介導shRNA來抑制膠質瘤細胞ZNF217表達，發現PI3K/AKT信號通路失活，該信號通路的下游基因E-cadherin表達明顯上調，N-cadherin、c-myc表達明顯下調，腫瘤細胞增殖、侵襲和遷移能力均明顯降低。本研究結果發現，NSCLC組織ZNF217蛋白陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，提示ZNF217蛋白可能與NSCLC的發生、發展有關。進一步研究發現，ZNF217蛋白表達與腫瘤T分期、N分期和TNM分期有關，而與性別、年齡、吸煙史、ECOG評分、病理類型、手術方式無關。提示ZNF217蛋白可能在NSCLC的侵襲和轉移過程中發揮重要作用。

韓亮等[14]研究發現，ZNF217蛋白低表達胃癌患者生存時間明顯長于ZNF217蛋白高表達胃癌患者。Shida等[15]研究發現，ZNF217蛋白陰性表達腫瘤患者無復發生存期和總生存期均長于ZNF217蛋白陽性表達腫瘤患者。Jiang等[16]研究發現，抑制ZNF217蛋白表達，可抑制前列腺癌進展。Cheng等[17]薈萃分析發現，ZNF217蛋白可作為預測惡性腫瘤患者預后的指標。以上研究表明，ZNF217蛋白可作為預測腫瘤患者預后的指標。但其能否用于預測NSCLC患者預后尚不清楚。本研究結果顯示，ZNF217蛋白陽性表達NSCLC患者中位OS明顯低于ZNF217蛋白陰性表達NSCLC患者。說明ZNF217蛋白亦可用于預測NSCLC患者預后。

綜上所述，NSCLC組織ZNF217蛋白表達明顯升高，其表達變化與腫瘤進展和患者預后不良有關。ZNF217有可能成為NSCLC精準治療的一個潛在靶點。