三陰乳腺癌組織KIAA1522、β-catenin表達變化及其與患者臨床病理特征和預后的關系

張潔，王磊，劉春玲

(唐山市人民醫院，河北唐山063001)

三陰乳腺癌(TNBC)是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長因子受體2(HER-2)均陰性的乳腺癌，約占乳腺癌總數的15%[1，2]。TNBC的惡性程度高、侵襲性強，易轉移和復發[3]，但目前對其轉移和復發的分子機制尚不清楚。KIAA1522是一個新發現的蛋白，該蛋白可能通過其富含脯氨酸的結構域與黏附蛋白和細胞骨架蛋白結合，在細胞的黏附、增殖、凋亡等生物學過程中發揮重要作用。β-連環蛋白(β-catenin)是Catenin家族中的一員，在細胞與細胞外基質的黏附過程中具有重要作用。兩種蛋白均能影響細胞黏附，而細胞黏附是腫瘤侵襲和轉移的重要條件。由此推測，二者有可能與TNBC的進展有關。本研究觀察了TNBC組織KIAA1522、β-catenin表達變化，并分析其表達變化與患者臨床病理特征和預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月～2016年12月唐山市人民醫院收治的TNBC患者85例。所有患者經術后組織病理檢查明確為非特殊類型的浸潤性乳腺癌，免疫組化染色ER、PR、HER-2均陰性[4，5]。排除特殊類型浸潤性乳腺癌或免疫組化染色ER、PR、HER2任何一項陽性者。患者均為女性，年齡31～78歲、平均56.1歲，腫瘤最大徑0.4～7.5 cm；組織學分級：Ⅰ級1例，Ⅱ、Ⅲ級84例；臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期64例，Ⅲ、Ⅳ期21例；Ki-67指數：<20% 11例，≥20% 74例；有淋巴結轉移43例，無淋巴結轉移42例。本研究經唐山市人民醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 KIAA1522、β-catenin表達檢測

1.2.1 組織芯片制作 取手術切除的乳腺癌組織及其配對的癌旁正常組織(距腫瘤組織邊緣>5 cm)，常規甲醛固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，56～58 ℃石蠟浸蠟，石蠟包埋。預切片，常規HE染色，顯微鏡下觀察。分別在乳腺癌組織和癌旁正常組織切片上選取有價值區域，在切片與組織蠟塊相應位置標記。用組織芯片陣列儀從組織蠟塊標記處打孔取樣，并轉移至空白石蠟的相應位置放樣，石蠟封固，制成芯片蠟塊，每個芯片蠟塊含30個點。然后將芯片蠟塊切片，制成組織芯片。

1.2.2 免疫組化染色 取組織芯片，常規脫蠟、水化，3% H2O2室溫孵育15 min，枸櫞酸鹽緩沖液高壓抗原修復，分別滴加兔抗人KIAA1522多克隆抗體(稀釋比1∶200)、鼠抗人β-catenin單克隆抗體(稀釋比1∶50)，4 ℃孵育過夜。次日，滴加生物素標記的羊抗兔/小鼠IgG二抗，室溫孵育30 min。DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.3 結果判定 由2位病理科主治以上醫師采用雙盲法獨立閱片。①KIAA1522陽性染色定位于細胞質，呈棕黃色或黃褐色顆粒。每張切片隨機選取10個400倍視野，評估染色強度；每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞比例。染色強度評分：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例評分：無陽性細胞為0分，陽性細胞比例≤25%為1分，陽性細胞比例>25%～50%為2分，陽性細胞比例>50%～75%為3分，陽性細胞比例>75%為4分。染色強度評分與陽性細胞比例評分乘積>3為KIAA1522陽性表達。②β-catenin陽性表達定位于細胞膜、細胞質或細胞核，呈棕黃色顆粒狀。每張切片隨機選取10個400倍視野，每個視野計數100個細胞，計算膜陽性率。膜陽性率>75%為β-catenin正常表達，膜陽性率≤75%為β-catenin異位表達。

1.3 隨訪 所有患者術后采用電話方式定期隨訪，隨訪截至2018年12月1日。以隨訪期間出現復發、轉移或失訪時結束隨訪，統計患者無病生存期(DFS)。DFS為自手術切除腫瘤開始至出現復發、轉移或死亡的時間。

1.4 統計學方法 采用SPSS23.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman等級相關分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織與癌旁正常組織KIAA1522、β-catenin表達比較 乳腺癌組織與癌旁正常組織KIAA1522陽性表達率分別為50.6%(43/85)、20.6%(27/85)，β-catenin異位表達率分別為64.7%(55/85)、43.5%(37/85)。乳腺癌組織KIAA1522陽性表達率、β-catenin異位表達率均明顯高于癌旁正常組織(χ2分別為6.217、7.676，P均<0.05)。

2.2 乳腺癌組織KIAA1522陽性表達與β-catenin異位表達的關系 43例KIAA1522陽性表達者中，β-catenin異位表達39例、正常表達4例；42例KIAA1522陰性表達者中，β-catenin異位表達16例、正常表達26例。乳腺癌組織KIAA1522陽性表達與β-catenin異位表達呈正相關關系(rs=0.550，P<0.01)。

2.3 乳腺癌組織KIAA1522、β-catenin表達與患者臨床病理特征的關系 乳腺癌組織KIAA1522陽性表達與臨床分期、Ki-67指數、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤最大徑、組織學分級無關(P均>0.05)；乳腺癌組織β-catenin異位表達與Ki-67指數、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤最大徑、組織學分級、臨床分期無關(P均>0.05)。見表1。

表1 乳腺癌組織KIAA1522、β-catenin表達與患者臨床病理特征的關系

注：*指采用Fisher精確概率檢驗。

2.4 乳腺癌組織KIAA1522、β-catenin表達與患者預后的關系 所有患者隨訪18～46個月，DFS為15～36個月。KIAA1522陽性表達者與陰性表達者中位DFS分別為28.1、29.2個月；β-catenin異位表達者與正常表達者中位DFS分別為28.1、29.3個月。KIAA1522陽性表達者中位DFS低于KIAA1522陰性表達者，β-catenin異位表達者中位DFS低于β-catenin正常表達者(P均<0.05)。見圖1、2。

圖1 乳腺癌組織不同KIAA1522表達者DFS曲線

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，其發病率和病死率均居女性惡性腫瘤首位[6]。TNBC約占乳腺癌總數的15%，是乳腺癌的一種特殊分子亞型，其惡性程度高、侵襲性強，易轉移和復發，患者預后較差。但目前對其轉移和復發的分子機制尚不清楚。

圖2 乳腺癌組織不同β-catenin表達者DFS曲線

KIAA1522編碼基因定位于人染色體1p35.1，其編碼蛋白可能通過富含脯氨酸的結構域與黏附蛋白和細胞骨架蛋白結合，在細胞的黏附、增殖、凋亡等生物學過程中發揮重要作用。有研究報道，KIAA1522過表達能促進非小細胞肺癌、食管癌、結直腸癌等細胞增殖，表明KIAA1522有可能具有促癌作用[7～11]。KIAA1522能通過激活ERK信號通路促進腫瘤細胞增殖，從而促進腫瘤形成，并通過抵抗細胞失巢凋亡參與腫瘤細胞遷移[11]。有研究將懸浮細胞KIAA1522基因敲降發現，其細胞團形成緩慢，細胞團小且松散，提示KIAA1522可能參與細胞的黏附過程。β-catenin是一種多功能蛋白，具有介導細胞黏附和信號傳導雙重活性[12]，不僅是細胞間黏附連接及細胞與細胞外基質黏附連接過程中的重要蛋白，還是Wnt信號傳導通路中的重要轉錄激活因子。β-catenin主要位于細胞膜，是一種重要的細胞黏附分子和細胞骨架蛋白。當細胞質與細胞核中出現β-catenin累積，標志著Wnt信號轉導通路激活[13，14]。失衡的β-catenin進入細胞核與Tcf/Lef家族結合，作為轉錄激活因子，進一步促進腫瘤細胞遷移[15]。β-catenin在TNBC組織中的表達明顯高于乳腺癌其他分子亞型[16]。被敲除β-catenin的TNBC細胞遷移能力顯著下降[17]。KIAA1522在轉錄水平調控相應的下游分子IQGAP1，通過下游分子與β-catenin競爭性結合α-catenin，導致cadherin-catenin復合物形成減少，黏附連接減弱，從而有利于腫瘤細胞遷移。此外，受到競爭不能與α-catenin結合的β-catenin，在細胞質與細胞核中累積，亦能促進腫瘤細胞遷移。兩種蛋白均能影響細胞黏附，而細胞黏附是腫瘤侵襲和轉移的重要條件。由此推測，二者有可能與TNBC的轉移和復發有關。

本研究結果顯示，乳腺癌組織KIAA1522陽性表達率、β-catenin異位表達率均明顯高于癌旁正常組織；乳腺癌組織KIAA1522陽性表達與臨床分期、Ki-67指數、淋巴結轉移有關，β-catenin異位表達與Ki-67指數、淋巴結轉移有關；進一步分析發現，乳腺癌組織KIAA1522陽性表達與β-catenin異位表達呈正相關關系。提示KIAA1522、β-catenin可能協同促進TNBC的發生、發展。本研究還發現，KIAA1522陽性表達者中位DFS低于KIAA1522陰性表達者，β-catenin異位表達者中位DFS低于β-catenin正常表達者，說明KIAA1522、β-catenin表達與TNBC患者預后有關。

綜上所述，TNBC組織KIAA1522陽性表達、β-catenin異位表達均明顯升高，其表達變化與腫瘤轉移和患者預后不良有關。二者聯合檢測對評估TNBC轉移和患者預后具有重要意義。